[发明专利]一株烈性副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_FE11的分离及应用

说明书

本发明公开一株烈性副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_FE11的分离及应用，所述的噬菌体vB_VpP_FE11的耐受温度＜70℃，pH值为4至11时可以存活。水产养殖环境中，pH条件一般为中性或偏酸性。本发明的副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_FE11可裂解133株食源性副溶血性弧菌菌株中的35株，裂解率为26.3%，说明该噬菌体为烈性噬菌体且具有广谱性。并验证噬菌体的体外裂菌能力，制备新型生物杀菌制剂，可以有效防控副溶血性弧菌感染，解决目前抗生素治疗副溶血性弧菌面临的耐药性问题。

技术领域

本发明涉及疾病防治领域，具体涉及副溶血性弧菌裂解性噬菌体及其应用。

背景技术

一般而言，养殖虾乃至其它水产品的细菌感染疾病，主要由副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)引起，严重阻碍经济平稳发展。副溶血弧菌是一种嗜盐性的革兰氏阴性菌，在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基平板呈现圆形、绿色菌落，弧菌显色平板呈现红色菌落，显微镜下呈现短杆或弧状，隶属弧菌科、弧菌属。PirAvp/PirBvp毒素可导致虾急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease，AHPND)，表现为昏睡或萎缩的肝胰腺，于2009年在我国首次爆发，然后扩散到越南，马来西亚和泰国，由于这种疾病，2013年虾的产量较2012年下降了约60％。另外，任何食用生的或未煮熟的虾、蟹、贝类和其他水产品的人都有感染副溶血弧菌的风险，极大威胁人类健康，五岁以下的儿童、老年人和自身免疫虚弱的人群相对容易被感染，感染人群表现为腹泻，呕吐，腹部绞痛，恶心、发烧等症状。2004年7月，在西班牙共确诊80例食物中毒患者，原因为食用了被副溶血弧菌污染的螃蟹；2018年9月27日，在委内瑞拉吃了新鲜蟹肉的人群中，共确诊26名因副溶血性弧菌感染的患者。

为提高水产品质量，降低细菌污染风险，抗生素广泛应用于水产品领域，如水产养殖场、运输链和销售链，这对我国当下水产品经济发展、食品安全和人民生活质量水平的确起到积极作用。但是，我国暂时没有出台抗生素针对水产品防控、消杀细菌标准，养殖户、批发商忽略抗生素消极影响，造成滥用，容易导致多重耐药致病菌爆发或者水产品中抗生素残留等严重性后果。近几年，多项微生物风险评估表明水产品中耐药性副溶血弧菌的检测率升高，即食食品也不例外，其中，来自不同食品的副溶血弧菌分离株，对链霉素的耐药率最高。这归因于包括水产品在内的动物养殖和销售大剂量施用抗生素，加快了细菌基因突变，产生抗性；另外，耐药基因一般定位在独立的质粒上，通过接合等方式可在不同种属的细菌之间转移和重组，因此，抗生素抗性基因很容易迅速传播，是抗生素使用过程最严重的问题。此外，抗生素施用期间，在快速消杀致病菌的同时，也不可避免对益生菌群造成不良影响，极易破坏水产品生存环境的生态平衡。人类食用抗生素残留的水产品后，也可能引起疾病，例如，氯霉素通过抑制身体骨髓造血功能，引起再生障碍性贫血症等疾病；呋喃唑酮可引起溶血性贫血、多发性神经炎、眼部损害和急性肝坏死，并有一定致癌性。越来越多的研究表明，抗生素滥用和多重耐药的副溶血弧菌爆发对全球人类的公共卫生和经济发展，特别是水产养殖行业，构成严重的威胁。目前，为快速有效地控制和终止致病性弧菌的增殖，预防和治疗的是主要手段是应用抗生素和消毒剂。但是抗生素的滥用，容易导致多重耐药致病菌爆发或者水产品中抗生素残留等严重性后果。近几年，多项微生物风险评估表明水产品中耐药性副溶血弧菌的检测率升高，主要原因就是抗生素的滥用。此外，抗生素在快速消杀致病菌的同时，也不可避免对益生菌群造成不良影响，极易对施用环境的生态平衡造成破坏。而且氯霉素、呋喃唑酮等抗生素对人体有一定的危害性，残留在水产品中的抗生素被人体摄入后，往往引起疾病。

越来越多的研究表明，抗生素滥用和多重耐药的副溶血弧菌爆发对全球人类的公共卫生和经济发展，特别是水产养殖行业，构成严重的威胁。除了抗生素之外消毒剂也是用于控制副溶血性弧菌感染的常用方法之一。例如，臭氧是一种强氧化剂，已在水产养殖业中用于杀死有害微生物。但是，臭氧是不稳定的，通常在水中会迅速分解。此外，尽管二氧化氯也被用作牡蛎净化过程中的副溶血弧菌消毒剂，但它是非特异性的，严重破坏了饲养水体的自然生态。