[发明专利]一种重组耐盐腺苷酸环化酶及其编码基因和应用

权利要求书

1.一种在高渗条件下制备环磷腺苷的方法，其特征在于，所述，包括以下步骤：向Tris-HCl缓冲液中添加重组耐盐腺苷酸环化酶的酶液、ATP、金属离子和氯化钠，建立酶催化反应体系，进行酶催化反应，生成cAMP；或者向Tris-HCl缓冲液中添加ATP、金属离子、氯化钠、表面活性剂和生产所述重组耐盐腺苷酸环化酶的重组菌的菌泥，建立全细胞催化反应体系，进行全细胞催化反应，生成cAMP，

其中，所述金属离子的浓度为50 mM，所述ATP的浓度为30 mM，所述表面活性剂用量为0.5 % （v/v）的Triton X-100，所述催化条件为pH 10.0，2.5M的氯化钠，反应温度为45℃；

所述重组耐盐腺苷酸环化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述耐盐腺苷酸环化酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述重组菌的宿主菌为Escherichia coli BL21(DE3)，重组载体为pET28a，所述耐盐腺苷酸环化酶编码基因插入pET28a的EcoRI和Nde I酶切位点之间；

重组耐盐腺苷酸环化酶的酶液和生产所述重组耐盐腺苷酸环化酶的重组菌的菌泥的获得方法，包括以下步骤：

（1）构建重组菌并活化，将活化的重组菌接种到LB培养基中，培养至OD600_nm为0.6-0.8时，加入诱导剂IPTG诱导表达，离心收集，生产所述重组耐盐腺苷酸环化酶的重组菌的菌泥；

（2）将步骤（1）得到的菌泥进行超声破碎，离心，上清液即为含耐盐腺苷酸环化酶的酶液。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌泥在超声破碎前用pH8.0、100 mMTris-HCl，清洗两遍，然后加入20 mL的pH8.0、100 mM Tris-HCl重悬。