[发明专利]一种测定化妆品中牛胆酸的方法

说明书

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种测定化妆品中牛胆酸的方法，用乙腈水溶液提取化妆品中的牛胆酸，乙腈水溶液饱和的正己烷除杂，取上清液用丹磺酰氯衍生反应，衍生物经C₁₈反相色谱柱分离，用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定。相较于分光光度计法、薄层层析法及氨基酸自动分析法等，具有分析速度快、灵敏度高、准确性好等显著优点；能够应用于多种化妆品中牛胆酸的检测，方法普适性好。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种测定化妆品中牛胆酸的方法。

背景技术

牛胆酸在《国际化妆品原料标准中文名称目录（2015年版）》及《国家食品药品监督管理总局关于发布已使用化妆品原料名称目录的通告（2014年第11号）》中都是允许使用的原料，它是一种含硫的非蛋白氨基酸，易溶于水，化学性质稳定。研究发现，牛胆酸具有抗氧化作用等生物学效应，有研究证实牛胆酸具有赋活肌肤细胞的能力，可源源不断地提供年轻肌肤快速与持久的能量补充与多重保护；同时它也具有提高肌肤免疫力，抵抗外界环境对肌肤的侵袭的功效。目前，市面上销售的多款化妆品产品明确标注添加了牛胆酸作为其功效成分。

牛胆酸的测定方法主要有薄层层析法、氨基酸自动分析法、气相色谱法和高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法因其快速高效、灵敏度高、重现性好及准确度高等特点，被广泛应用在食品和生物组织中牛胆酸的测定中，但关于应用高效液相色谱测定化妆品中牛胆酸的相关报道较少。因此，开发一种快速、灵敏度高的液相色谱分析方法，对于化妆品中牛胆酸的检测分析具有十分重要的意义。

发明内容

针对缺少关于化妆品中牛胆酸的高效液相检测方法的现状，本发明提供了一种化妆品中牛胆酸的检测方法，用乙腈水溶液提取化妆品中的牛胆酸，正己烷除杂，取上清液用丹磺酰氯衍生反应，衍生物经C₁₈反相色谱柱分离，用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定。

本发明的技术方案如下：

一种测定化妆品中牛胆酸的方法，包括以下步骤：

（1）提取：称取适量试样，加入乙腈水溶液，超声提取；冷却至室温后，加入乙腈水溶液饱和的正己烷，充分混合后静置，用吸管将上层正己烷絮凝状物质仔细吸净弃去；下层溶液中再加入乙腈水饱和的正己烷，充分混合后静置，弃去上层正己烷；定容、混匀、离心，上清液备用；

（2）衍生化：步骤（1）得到的溶液加入碳酸钠缓冲溶液、丹磺酰氯溶液，室温避光衍生反应，加入盐酸甲胺溶液涡旋混合，以终止反应，避光静置至沉淀完全；取上清液经微孔滤膜过滤，待测；

（3）测定：将试液和标准工作溶液的衍生液采用高效液相色谱法进行分析测定；

（4）绘制标准曲线，外标法定量。

所述步骤（1）乙腈水溶液中乙腈、水的体积比为1:9。

所述的步骤（3）的高效液相色谱仪参考条件为：

色谱柱：C₁₈反相色谱柱，250 mm×4.6 mm(i,d)，5 μm；

流动相：乙腈：20 mmol/L乙酸铵溶液=30:70（体积比）；

流速：1.0 mL/min；

柱温：35 ℃；

进样体积：20 μL；

检测波长：254 nm。

本发明的有益效果：

（1）提供了一种液相色谱测定化妆品中牛胆酸的方法，相较于分光光度计法、薄层层析法及氨基酸自动分析法等，具有分析速度快、灵敏度高、准确性好等显著优点。

（2）本发明能够应用于多种化妆品中牛胆酸的检测，方法普适性好。

（3）在空白基质中添加适量标准品，按照本标准建立的方法检测分析，根据信噪比确定牛胆酸的方法检出限为50 mg/kg（图5a），定量限为150 mg/kg（图5b）。

附图说明