[发明专利]一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统，其特征是，所述纳米系统包括金属氧化物纳米颗粒以及修饰在金属氧化物表面的葡萄糖氧化酶；所述金属氧化物纳米颗粒为四氧化三铁纳米颗粒；金属氧化物表面还附有PAH层，所述葡萄糖氧化酶与PAH的氨基共价缀合连接；

所述纳米系统的制备方法包括：将金属氧化物纳米颗粒与PAH溶液混合，在室温下搅拌，反应完成后，将混合溶液离心，使得金属氧化物表面形成PAH涂层，得到金属氧化物/PAH纳米颗粒；然后，添加激活后的葡萄糖氧化酶，与金属氧化物/PAH纳米颗粒混合搅拌，搅拌反应完成后，将混合物离心、洗涤，实现将葡萄糖氧化酶共价缀合到PAH的氨基上；

其中，将葡萄糖氧化酶与金属氧化物/PAH纳米颗粒混合之前，将四甲基氢氧化铵1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基磺基琥珀酰亚胺钠盐按照一定的质量比添加到葡萄糖氧化酶中，激活葡萄糖氧化酶中的羧基。

2.如权利要求1所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统，其特征是，所述级联类酶纳米系统中，葡萄糖氧化酶的酶活力值范围为30-100 U/mL。

3.如权利要求1所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统，其特征是，所述级联类酶纳米系统中，葡萄糖氧化酶的质量百分比含量为30%-50%。

4.如权利要求1所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统，其特征是，所述级联类酶纳米系统能够在pH为5.5-8.5的缓冲液体系内发挥促进伤口愈合的最佳效果。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，包括：将金属氧化物纳米颗粒与PAH溶液混合，使得金属氧化物表面形成PAH涂层；然后，添加葡萄糖氧化酶，将葡萄糖氧化酶共价缀合到PAH的氨基上。

6.如权利要求5所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，所述金属氧化物纳米颗粒与PAH溶液混合的过程包括：配置含有PAH的NaCl溶液，所述PAH在NaCl溶液中的浓度为5-20 mg/mL。

7.如权利要求6所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，所述PAH在NaCl溶液中的浓度为10 mg/mL。

8.如权利要求5所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，金属氧化物与PAH溶液混合后在室温下搅拌，反应完成后，将混合溶液离心得到金属氧化物/PAH纳米颗粒。

9.如权利要求8所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，所述搅拌时间为2-5h。

10.如权利要求9所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，所述搅拌时间为3h。

11.如权利要求5所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，将葡萄糖氧化酶与金属氧化物/PAH纳米颗粒混合之前，激活葡萄糖氧化酶中的羧基。

12.如权利要求11所述的一种促进糖尿病伤口愈合的级联类酶纳米系统的制备方法，其特征是，激活葡萄糖氧化酶中的羧基的具体过程包括：将四甲基氢氧化铵1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基磺基琥珀酰亚胺钠盐按照一定的质量比添加到葡萄糖氧化酶中；

所述四甲基氢氧化铵1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐：N-羟基磺基琥珀酰亚胺钠盐的质量比为3.0-5.0 mg : 3.3-5.5 mg；

所述葡萄糖氧化酶的浓度范围是50-200 μg/mL；

所述激活反应保持20-60min。