[发明专利]一种菌藻共生系统胞外多聚物的提取方法

说明书

本发明公开了一种菌藻共生系统胞外多聚物的提取方法，该方法包括：取共生系统的培养液离心，得到溶解型胞外多聚物；分离上清后将沉淀重悬于NaCl提取液，离心分离上清后得松散型胞外多聚物；将沉淀无再重悬于NaCl提取液，在100‑180rpm条件下震荡20‑40min后，置于50‑70℃下水浴20‑40min，离心分离上清液，得紧密结合型胞外多聚物。本发明对菌藻共生系统采用“震荡+加热法”的组合方式进行胞外多聚物的提取，不仅能够大量提取共生系统的胞外多聚物，而且能够不破坏共生菌藻细胞，不造成EPS的污染，从而提取出有效的EPS组分。

技术领域

本发明涉及水生物处理领域，尤其涉及一种菌藻共生系统胞外多聚物的提取方法。

背景技术

胞外聚合物物质(EPS)是细菌、真菌、微藻、蓝藻等微生物合成的多功能代谢物，是由多糖类、蛋白质、DNA、腐殖质等组成，其附着在菌体表面，阻止一些有害物质进入细胞，对细胞起保护作用。

微生物细胞周围的EPS可在水体中释放，是构成溶解有机物的一部分，可吸附大量金属(胶体)，如As、Cu、Pb和Cd，并通过形成三元或二元络合物改变其流动性。EPS对金属(胶体)的吸附可能是由于离子交换、表面与-OH、-COOH、-NH和C＝O等官能团的络合作用。EPS组分中的巯基、羟基、多糖的半缩醛基、蛋白质中的酪氨酸和色氨酸等，除了具有吸附性质外，还参与了元素的氧化还原转化。

然而，进行EPS组分和功能分析时，如何有效的提取和分离EPS是后续研究的重要前提，以往关于EPS的研究大多是针对细菌、真菌和微藻类的单独体系进行的，而对复合菌藻共生系统EPS的提取并没有一种广泛认可且有效的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：针对上述研究的不足，如何提供一种关于菌藻共生系统胞外多聚物的提取方法，该方法不仅能够大量提取共生体系EPS，而且能够不破坏共生细胞，从而有效的提取EPS组分。

本发明的技术方案为：一种菌藻共生胞外多聚物的提取方法，包括以下步骤：

(1)取菌藻共生系统的培养液，离心分离上清液，得到溶解型胞外多聚物；

(2)将步骤(1)所得的沉淀物重悬于NaCl提取液，离心分离上清，得松散型胞外多聚物；

(3)将步骤(2)所得的沉淀物重悬于NaCl提取液，在100-180rpm条件下震荡20-40min后，50-70℃加热20-40min，离心分离上清液，得紧密结合型胞外多聚物。

进一步地，步骤(1)中，所述离心条件为：在4℃，5000rpm离心15-20min，优选为20min。

进一步地，步骤(2)中，所述的离心条件为：在4℃，8000rpm离心15-20min，优选为20min。

进一步地，步骤(2)中，所述提取液为质量分数0.04-0.06％NaCl溶液，优选为0.05％NaCl溶液。

作为优选，步骤(3)中，所述提取液为质量分数0.04-0.06％NaCl溶液，优选为0.05％NaCl溶液。

作为优选，步骤(3)中，所述震荡条件为100rpm，30min。

作为优选，步骤(3)中，加热条件为水浴60℃，30min。

作为优选，步骤(3)中，所述的离心条件为：在4℃，10000rpm离心15-20min。

作为优选，上述菌藻共生系统为烟曲霉和集胞藻Synechcystis sp.PCC6803组成的共生体系。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、通过菌藻共生系统胞外多聚物的分级提取操作及组分测定，可获得不同级层的菌藻胞外多聚物。