[发明专利]一种多重核酸扩增产物检测方法及试剂盒

说明书

本发明属于酸检测技术领域，公开一种多重核酸扩增产物检测方法，包括：建立包含显示剂的扩增反应体系，所述扩增反应体系中还包含待测样本、引物和扩增试剂；然后通过显色染料法判读扩增反应体系扩增结果；再根据判读的扩增结果判断是否进行试纸条检测。该方法将显色染料检测法与试纸条检测相结合，通过在多重核酸扩增体系中加入显色剂和不同的修饰引物，先利用显色剂的显色反应实现可视化判读核酸扩增结果，判断待测液是否成功扩增，扩增成功的待测液再通过免疫层析试纸条实现目标核酸的检测。由此可以剔除阳性样本中的假阳性样本，从而降低假阳率，提高检测的准确度，同时试纸条的检测线可全部用于检测指标，保证了扩增体系的多重检测能力。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体涉及一种多重核酸扩增产物检测方法及试剂盒。

背景技术

病原体感染导致的传染性疾病的诊断往往需要结合病原学检查进行确诊，而对于传染性高或致死率高的病原体(如新型冠状病毒(SARS-COV-2))的检测，以及复杂病情(疑似多重感染)的病原体检测，往往需要用到多靶标联检。

在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所发布的新型冠状病毒核酸检测引物和探针序列中，说明新冠病毒检测试剂盒的目标序列分别为开放读码框1ab(open readingframe，ORF1ab)、核壳蛋白(nucleoprotein，N)基因区域；同时检测需以人的基因作为内参，用于监控样本采集和提取效果，避免假阴性结果。而采用单靶标检测技术对某份待检样品中的多种可疑靶标进行检测，需要对一份样品进行反复的操作，不但大幅增加了工作量，延长了检测周期，增加了失误概率，同时可能带来样品污染及样品生物危害等，而且对检测结果可靠性、检测人员/环境生物安全均带来问题。因此基于检测性能(敏感性、特异性、样品耐受性)与操作性能(简便、快速)等多个方面的因素，需要对一份样本中存在的多个靶标进行同步检测，即多重检测。多重扩增在单个反应管中同时进行多个反应，既保留了传统扩增的相对高的灵敏度，又能一次性扩增多个靶基因，可节省大量的时间和试剂成本，操作简单，具有巨大的时效性和经济性。

目前市场上多靶标病原体核酸检测主要是利用多重PCR实现扩增，对应的PCR探针法、多重扩增-杂交、多重扩增-毛细管电泳、多重扩增-质谱等检测技术只适用于大医院、疫控中心等大型医疗机构，因为设备成本高、操作环境和人员要求高等原因，很难用在基层现场快检以及用于病原体流行的早期筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多重核酸扩增产物检测方法，该方法将显色染料检测法与试纸条检测相结合，通过在多重核酸扩增体系中加入显色剂和不同的修饰引物，先利用显色剂的显色反应实现可视化判读核酸扩增结果，之后再利用核酸试纸条实现特定核酸产物的检测，有效提高检测效率和检测准确度。

本发明的另一目的在于提供一种多重核酸扩增产物检测试剂盒，有效提高检测效率和检测准确度。

具体地，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种多重核酸扩增产物检测方法，包括：建立包含显示剂的扩增反应体系，所述扩增反应体系中还包含待测样本、引物和扩增液；然后通过显色染料法判读扩增反应体系扩增结果；再根据判读的扩增结果判断是否进行试纸条检测。

根据本发明提供的一些实施方式，所述多重核酸扩增产物检测方法包括步骤：

S1：建立扩增反应体系：提供待测样本，所述待测样本含有内参核酸；提供引物，所述引物包括内参引物和目标核酸修饰引物，将待测样本、内参引物、目标核酸修饰引物、显色剂和扩增液混合形成混合液，进行扩增反应，得到待测液；

S2：显色染料法判读扩增结果：观察待测液中显色剂的显色反应，如未发生显色变化，停止检测，如发生显色变化，进行下一步；

S3：试纸条检测：将待测液转移至试纸条进行检测。