[发明专利]一种体外快速检测新型冠状病毒的方法及应用

权利要求书

1.一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将识别新型冠状病毒棘突蛋白的多肽N端用荧光分子进行标记，得到荧光标记多肽探针；

(2)在PBS缓冲液中加入荧光标记多肽探针、新型冠状病毒棘突蛋白，另一种反应只在PBS缓冲液中加入荧光标记多肽探针，作为负对照；

室温下静置反应5分钟，用254nm紫外灯直接照射反应液，呈现绿色荧光；或在激发波长320nm、发射波长350-650nm下检测荧光强度，绘制不同浓度新型冠状病毒棘突蛋白或其RBD与荧光强度的对应曲线；

与负对照组进行比较，根据前者是否呈现橙色荧光或后者荧光强度的增强，从而确定是否存在新型冠状病毒棘突蛋白或新型冠状病毒棘突蛋白的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的方法，其特征在于，所述多肽序列为：H2N-Thr-Ala-Gln-Met-Tyr-Gly-Gln-Ala-Lys-Tyr-Phe-Leu-Asp-Lys-Phe-Asn-His-Glu-Ala-Glu-Asp-Leu-Phe-Tyr-Gln-Ser-Ser-Leu-Gly-Lys-Gly-Asp-Phe-Arg-Gly-Tyr-COOH。

3.根据权利要求1所述的一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的方法，其特征在于，所述荧光分子为1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯，其分子量为376.45，结构式为：

4.根据权利要求1所述的一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的方法，其特征在于，荧光标记多肽探针的制备方法包括：

用甲酯和乙酯作为羧酸的保护基，然后将1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯的羧基(—COOH)和多肽的氨基(—NH2)同时脱去一分子水，进行脱水缩合反应，将1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯连接到多肽的氨基端；所述的新型冠状病毒即刺突蛋白的序列为(NCBIAccession No.:QHD43416.1)。

5.根据权利要求4所述的一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的方法，其特征在于，所合成的荧光标记多肽探针序列为：TPE-Thr-Ala-Gln-Met-Tyr-Gly-Gln-Ala-Lys-Tyr-Phe-Leu-Asp-Lys-Phe-Asn-His-Glu-Ala-Glu-Asp-Leu-Phe-Tyr-Gln-Ser-Ser-Leu-Gly-Lys-Gly-Asp-Phe-Arg-Gly-Tyr-COOH，其中TPE为1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯，在多肽的氨基端进行修饰。

6.根据权利要求1述的一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的应用，其特征在于，所述待测样品为新型冠状病毒咽拭子、鼻拭子或肺部灌洗液，在PBS缓冲液中加入荧光标记多肽探针，室温下静置反应5分钟，用254nm紫外灯直接照射反应液，呈现绿色荧光；或在激发波长320nm、发射波长350-650nm下检测荧光强度，绘制不同浓度新型冠状病毒棘突蛋白或其RBD与荧光强度的对应曲线。

7.一种体外快速检测新型冠状病毒棘突蛋白的试剂盒，其特征在于，包括荧光标记多肽探针，所述荧光标记多肽探针为：用荧光分子标记的可识别新型冠状病毒棘突蛋白的多肽N端。