[发明专利]一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法及其药物筛选方法在审
| 申请号： | 202110157872.9 | 申请日： | 2021-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN112980794A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 王磊;李玲琍;南开辉 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学;中国科学院大学温州研究院(温州生物材料与工程研究所) |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 王宏雷 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 蛋白 凝胶 体外 构建 神经 细胞 组织 模型 方法 及其 药物 筛选 | ||
1.一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1） 称取甲基丙烯酸化明胶（GelMA）样品，溶解在 PBS 溶液中，配制成水凝胶溶液，配制光引发剂溶液，过滤除菌备用；
（2）根据实验设计需求，配制浓缩细胞悬液：配制含I2959 的GelMA溶液得到水凝胶前驱体溶液，取水凝胶前驱体溶液，加入浓缩细胞悬液，涡旋均匀，置于96孔板中，于紫外点光源下辐照成胶，得到3D共培养体系，每孔加完全培养基，置于细胞培养箱中培养，每天半量换液；得到体外三维神经母细胞瘤微组织的模型。
2.根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的步骤（1）中配制的水凝胶溶液中GelMA的含量为5wt-10wt%。
3.根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的光引发剂为I2959，所述的水凝胶前驱体溶液中光引发剂为I2959含量为0.5wt%。
4.根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的步骤（2）中加入浓缩细胞悬液浓度为105/孔。
5. 根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的紫外点光源强度为100mW/cm2 ，辐照时间为2-5min。
6.根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的步骤（2）中加入浓缩细胞悬液为第三代原代细胞。
7.根据权利要求1所述的一种基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型的构建方法，其特征在于，所述的步骤（2）中每孔加完全培养基的量为100μl。
8.一种神经母细胞瘤药物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求1-7任意一项所述的基于蛋白基水凝胶体外构建神经母细胞瘤微组织的模型培养，培养至第7天时，加入系列浓度的神经母细胞瘤药物培养基刺激肿瘤微组织团块，在设定时间点，采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率，从而实现对药物浓度的筛选。
9.根据权利要求1所述的神经母细胞瘤药物的筛选方法，其特征在于，所述的神经母细胞瘤药物的浓度为1-500μg/ml。
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