[发明专利]一种犬腺病毒一体化核酸检测卡盒

说明书

本发明公开了一种犬腺病毒一体化核酸检测卡盒，包括顶部带盒盖的盒体，盒体内从上至下依次设有裂解腔、第一清洗腔和第二清洗腔，其中裂解腔连通至盒盖，第二清洗腔连通至盒体外侧底部设置的反应腔；所述裂解腔、第一清洗腔、第二清洗腔和反应腔的两两相连区间分别设置有柱塞孔方向垂直于连接方向的柱塞，柱塞的柱塞孔内设有疏水性液态封闭材料；所述反应腔内设有扩增反应液，所述反应腔中设有可熔性材料层，可溶性材料层内包埋有犬腺病毒Ⅰ型hexon基因和犬腺病毒Ⅱ型hexon基因的引物探针混合液。本发明可以在相对较低成本的情况下，快速一体化地对犬腺病毒进行PCR扩增及检测，解决现行技术重复性差、检测方法耗时、操作复杂等问题。

技术领域

本发明涉及一种犬腺病毒一体化核酸检测卡盒，属于医学检测技术领域。

背景技术

犬腺病毒是已知哺乳动物腺病毒属中致病性最强、形态结构也研究的较为彻底的一种动物病毒。犬腺病毒(canine adenovirus，CAV) 有两个血清型：CAV-1型和CAV-2型。CAV-1是传染性犬肝炎的病原体，此病是犬科动物疾病中与犬瘟热及病毒性肠炎相并列的3种主要传染病之一。犬腺病毒Ⅱ型(Canine adenovirus type 2，CAV-2) 是与传染性气管支气管炎(canine infectious tracheobronchitis， ITB)的发病机理有关的病因之一，可引起犬轻度急性上呼吸道疾病。犬传染性支气管炎是一种呼吸道传染病，具有很强的传染性，呈群发态势，对犬危害很大。

犬腺病毒同其它腺病毒一样，其基因组为线状、双股DNA。其纤突直径为2nm，长度随腺病毒型而不同，CAV-2的纤突为35～37nm，比CAV-1的纤突长10nm左右。纤突的远端部分为腺病毒型特异性抗原，纤突的基部为亚群特异性抗原。纤突顶端为一个4nm直径的球形物(又叫knob)，这是病毒感染细胞时结合于细胞受体的部分，血凝素也在球部，两型犬腺病毒在血凝方面的差别和纤突结构有关，在和红细胞发生凝集时，两者可能使用不同的或不完全相同的RBC表面受体。纤突的氨基酸保守区为底部(又叫tail)，与五邻粒基底相连，远离壳粒的一端为C末端，中间部分是由脯氨酸和疏水氨基酸残基组成(又叫shaft)，含有多个重复序列，但其氨基酸组成却不保守，这与腺病毒不同血清型的抗原特异性相关。纤突蛋白和某些非结构蛋白均系糖基化蛋白。另外纤突蛋白可阻断腺病毒大分子合成，抑制病毒繁殖。

近年来随着宠物市场的不断扩大以及实验动物学的发展和实验犬只的用量不断增加，犬与人类的接触更加密切和频繁，而由CAV-1 型和CAV-2型引起的病毒病症状及后续的治疗不同，因此鉴定两种型别犬腺病毒的诊断方法对犬类健康质量的控制显得尤为重要。

目前对犬腺病毒的检测方法主要有病毒分离法、抗体检测、核酸分子检测法。具体如下：

(1)病毒的分离和鉴定：可采取发病初期的病犬血液、扁桃体棉拭子或死亡动物的肝、脾等材料处理后接种犬肾原代细胞或继代细胞，根据毒株和接毒剂量的不同，细胞病变最早出现于接毒后30小时，但有时需待一周才能见到。

(2)抗体检测：病毒感染后会使体内出现特异性免疫反应，产生特异性的抗体，可通过酶联免疫(ELISA)或胶体金等方法检出。该方法设备简单，需要的试剂较少，操作简捷方便，可以在数小时内得到结果。但因IgM、IgG抗体产生的窗口期及交叉反应，所以此法适用于初步筛查。

(3)核酸分子检测法：通过对病毒DNA的同源性比较，可在其基因序列的保守区(如六邻体蛋白基因)设计出能对所有腺病毒进行特异性扩增的引物，通过PCR扩增将腺病毒从其它病毒中鉴别出来。

病毒分离法检测周期长，且要求的病毒培养实验室在普通的宠物检测单位极少配备。故目前腺病毒的检测主要集中在抗体和核酸检测。抗体检测操作便捷、检测迅速，可作为核酸诊断的补充手段，但由于抗体检测“假阳性”，“假阴性”和灵敏度等局限性，不适合用于病原的确诊，也不适用于在低流行地区的流行病学调查。核酸检测目前是腺病毒检测的“金标准”，具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点。