[发明专利]一种登革热病毒一体化快速分型卡盒

说明书

本发明公开了一种登革热病毒一体化快速分型卡盒，包括顶部带盒盖(2)的盒体(1)，盒体(1)内从上至下依次设有带裂解液的裂解腔(3)、带第一清洗液的第一清洗腔(4)和带第二清洗液的第二清洗腔(5)，其中裂解腔(3)连通至盒盖(2)，第二清洗腔(5)连通至盒体(1)外侧底部设置的反应腔(6)；所述裂解腔(3)、第一清洗腔(4)、第二清洗腔(5)和反应腔(6)的两两相连区间分别设置有柱塞孔方向垂直于连接方向的柱塞(7)，柱塞(7)的柱塞孔内设有疏水性液态封闭材料；所述反应腔(6)内设有扩增反应液，扩增反应液包括RNA‑directTM Realtime PCR Master Mix和四组不同型登革热病毒的引物探针混合液；所述裂解腔(3)内设有能穿过柱塞(7)的柱塞孔的磁珠(8)。本发明可以在相对较低成本的情况下，一管反应即可鉴别出登革病毒四种血清型，解决现行技术重复性差、检测方法耗时、操作复杂无法实现早期筛查和快速诊断等问题。

技术领域

本发明涉及一种登革热病毒一体化快速分型卡盒，属于医学检测技术领域。

背景技术

登革热病毒(Dengue virus,DENV)是一种蚊媒传播引起的急性发热性传染病的病毒，主要发生在热带、亚热带地区，全球有100多个国家出现流行，每年大约有5000万到1亿人受到感染。随着全球气候变暖引起的地理分布区的改变、旅游、交通的加速发展及病毒载体蚊虫的迁移，登革热病毒将会波及到更多地区。目前，根据登革热病毒基因结构的包膜蛋白E抗原性不同，可分为血清DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4共四型。登革病毒感染后可导致登革热(Dengue fever，DF)、登革出血热(Dengue hemorrhagic fever，DHF)、和登革休克综合症(Dengue shock syndrome，DSS)，甚至在不及时治疗的情况下出现死亡。在临床上，症状主要表现为持续型轻度发热，并伴有严重头痛、全身乏力、眼球后疼痛、恶心、呕吐、肌肉和关节痛以及出疹。迄今为止还没有一种有效的疫苗防治登革热的发生，其防治工作非常困难。因此，临床上快速准确地诊断登革热病毒感染至关重要。

目前，检测登革热病毒感染的常规诊断方法通常包括病毒分离培养、血清学检测、核酸分子检测等方法。具体如下：

(1)病毒分离培养

登革病毒是一种具有严格的细胞内存活的生物，必须生活在活的细胞组织内，将病毒接种在细胞系上培养，根据观察病毒对其产生的变化(病变等现象)和应用特异、敏感的检测技术，检出病毒的存在和型别。需要生物安全二级(BSL-2)实验室，在标本运输过程中保持低温(冷冻或冷藏)对于病毒分离非常重要。分离到登革病毒可以确诊，但培养所需周期较长，需要数天，该法在临床诊断中应用受限，不适于快速诊断。

(2)血清学检测

当人体感染登革病毒后，血清中可产生特异性的抗体，根据抗原抗体特异性结合的原理，利用酶与底物的作用产生可见的颜色反应，显色程度与特异性抗原抗体含量呈正相关。主要通过酶联免疫(ELISA)或胶体金等方法检出，但其干扰因素较多(如温度、时间)，重复性不好；通常需5～7d血清中才能达到抗体能够检测水平，同时登革热抗体与其他黄病毒存在交叉反应，且容易受到自身抗体、嗜异性抗体等干扰，出现假阳性率较高，故血清学检测作为登革热病毒检测局限性较大。

(3)核酸分子检测法

登革病毒含RNA基因组，因此PCR前需经过逆转录酶作用，合成第一条cDNA链(RT)，再进行扩增(PCR)，即RT-PCR。多种逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法可用于登革病毒核酸检测，包括一步法RT-PCR、实时荧光RT-PCR或套式RT-PCR等方法等。根据基因扩增产物的片段大小可判断是否登革病毒或某一型登革病毒。检测所需时间短，可确诊且能分型，可用于早期诊断，但核酸检测容易因污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作。阴性结果不能排除登革热诊断，需采集第二份标本(发病5天后)开展血清学检测，进行确诊。