[发明专利]一种诱变菌种以及从植物甾醇制备胆酸类化合物的方法有效
申请号: | 202110150455.1 | 申请日: | 2021-02-03 |
公开(公告)号: | CN112899191B | 公开(公告)日: | 2022-09-02 |
发明(设计)人: | 蒋红平;唐杰;李斌;郭志军 | 申请(专利权)人: | 湖南醇康医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N15/01;C12P33/02;C12P33/00;C12P33/06;C12P39/00;C07J9/00;C12R1/32;C12R1/645 |
代理公司: | 北京东国专利商标代理事务所(普通合伙) 11980 | 代理人: | 董文国;任冠举 |
地址: | 410000 湖南省长沙市高新开*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 诱变 菌种 以及 植物 制备 胆酸 化合物 方法 | ||
1.分支杆菌Mycobacterium sp.NRRL B-3805的诱变菌种,保藏编号为CCTCCM2020987。
2.权利要求1所述的保藏编号为CCTCC M2020987的诱变菌种在制备4-胆烯酸-3-酮、石胆酸、鹅去氧胆酸或7-酮石胆酸中的应用。
3.一种从植物甾醇制备4-胆烯酸-3-酮的方法,其特征在于,将权利要求1所述的保藏编号为CCTCC M2020987的诱变菌种经培养后接种至转化培养基,对式Ⅰ所示植物甾醇进行发酵转化,得到式Ⅱ所示4-胆烯酸-3-酮;
其中,R为-(CH2)3CH(C2H5)CH(CH3)2、-CH2CH=CHCH(C2H5)CH(CH3)2、-(CH2)3CH(CH3)CH(CH3)2或-CH2CH=CHCH(CH3)CH(CH3)2。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述发酵转化方法为:将权利要求1所述的保藏编号为CCTCC M2020987的诱变菌种经一级种子培养和二级种子培养后加入转化培养基中,接种量1%~30%,温度20-30℃,转速200~500rpm,空气流量0.1~0.5Nm3/h,压力0.01~0.1MPa,转化时间为96~144h。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述一级种子培养和二级种子培养的培养基配方为:酵母膏粉10~20g/L,葡萄糖15~30g/L,硝酸钠2~6g/L,磷酸氢二铵0.1~1g/L,pH=7.5;
所述转化培养基配方为:植物甾醇10~40g/L,大豆油80~200g/L,玉米浆10~100g/L,硝酸钠2~6g/L,磷酸氢二铵0.1~1g/L,调pH=8.0。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,发酵转化后,进行后处理,得到式Ⅱ所示4-胆烯酸-3-酮;
所述后处理具体为:
调节体系pH值为5.0-6.0,加热搅拌后,静止分层;取油层用甲醇进行提取,浓缩除去溶剂后,用乙酸乙酯回流打浆,冷却析出固体后过滤;滤液浓缩除去溶剂,用氯仿和水,在pH12-13的条件下,常温搅拌、静置分层;取水相调节pH至1.0,静置分层;取分层后得到的油状物,为式Ⅱ所示4-胆烯酸-3-酮。
7.一种从植物甾醇制备石胆酸的方法,包括以下步骤:
A)将权利要求1所述的保藏编号为CCTCC M2020987的诱变菌种经培养后接种至转化培养基,对式Ⅰ所示植物甾醇进行发酵转化,得到式Ⅱ所示4-胆烯酸-3-酮;
B)将上述4-胆烯酸-3-酮进行加氢反应和还原反应,得到式Ⅲ所示石胆酸;
其中,R为-(CH2)3CH(C2H5)CH(CH3)2、-CH2CH=CHCH(C2H5)CH(CH3)2、-(CH2)3CH(CH3)CH(CH3)2或-CH2CH=CHCH(CH3)CH(CH3)2。
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