[发明专利]一种检测LPCAT1基因表达量的引物探针组、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测LPCAT1基因表达量的引物探针组，其特征在于：包括组分A和组分B；

所述组分A包括：

SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物LPCAT1-FP，

SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的下游引物LPCAT1-RP，

和含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的探针LPCAT1-probe，所述探针LPCAT1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；

所述组分B包括：

SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的上游引物ABL1-FP，

SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的下游引物ABL1-RP，

以及含有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的探针ABL1-probe，所述探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团TAMRA。

2.一种检测LPCAT1基因表达量的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物探针组。

3.根据权利要求2所述的检测LPCAT1基因表达量的试剂盒，其特征在于：

所述引物探针组的组分A中上游引物LPCAT1-FP、下游引物LPCAT1-RP与探针LPCAT1-probe的摩尔比为3:3:2；所述引物探针组的组分B中上游引物ABL1-FP、下游引物ABL1-RP与探针ABL1-probe的摩尔比为3:3:2。

4.根据权利要求2或3所述的检测LPCAT1基因表达量的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有SEQ ID NO.7所示LPCAT1基因片段的阳性对照质粒和含有SEQ ID NO.8所示ABL1基因片段的内参对照质粒。

5.根据权利要求4所述的检测LPCAT1基因表达量的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照质粒为在GV219质粒的XhoI / KpnI酶切位点插入SEQ ID NO.7所示LPCAT1基因片段的阳性质粒，所述内参对照质粒为在GV219质粒的XhoI/ KpnI酶切位点插入SEQ ID NO.8所示ABL1基因片段的内参质粒。

6.一种定量检测LPCAT1基因表达量的方法，其特征在于：采用权利要求2所述的试剂盒，具体步骤如下：

第一步，配制不同浓度的阳性对照质粒加入组分A进行PCR反应并检测LPCAT1基因拷贝数量；配制不同浓度的内参对照质粒加入组分B进行PCR反应并检测ABL1基因拷贝数量；分别绘制内参对照质粒和阳性对照质粒的荧光标准曲线；

第二步，提取待测样本的RNA，反转录成cDNA；

第三步，以第二步得到的cDNA为模板，分别加入组分A和组分B进行扩增反应，分别检测组分A扩增后cDNA中LPCAT1基因的拷贝数和组分B扩增后cDNA中ABL1基因的拷贝数；LPCAT1基因的拷贝数与ABL1基因的拷贝数的比值即为LPCAT1基因相对表达量。