[发明专利]慢病毒贴壁细胞培养工艺在审
| 申请号： | 202110146692.0 | 申请日： | 2021-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN112779226A | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 胡迪超;马红;隋礼丽;孔令洁 | 申请（专利权）人： | 苏州博腾生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/071 |
| 代理公司： | 苏州新知行知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32414 | 代理人： | 陈勐哲 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 细胞培养 工艺 | ||
【权利要求书】：
1.一种慢病毒贴壁细胞培养工艺，其特征在于：其包括以下步骤：
S1将HEK293T细胞在装有VP-SFM培养基和低浓度的胎牛血清的培养装置中进行适应性驯化培养；
S2步骤S1驯化培养良好的HEK293T细胞建立细胞库；
S3将对数生长期的HEK293T细胞接种至细胞工厂；
S4 在四质粒系统中，对HEK293T细胞进行转染；
S5转染50～100h后，收获细胞培养上清液，即可获得细胞活力达85%以上、转染上清滴度5×106 TU/mL以上的慢病毒细胞。
2.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺，其特征在于：所述的步骤S1中，胎牛血清的浓度为0.5%～1.5%。
3.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺，其特征在于：所述的步骤S3中，HEK293T细胞接种至细胞工厂时的细胞接种密度为2×104～6×104/cm2。
4.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺，其特征在于：步骤S3中的细胞工厂为Nunc的CF-2细胞工厂。
5.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺，其特征在于：步骤S4中，使用PEIpro法转染HEK293T细胞，PEIpro:DNA按1：1进行转染。
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