[发明专利]慢病毒贴壁细胞培养工艺在审
申请号: | 202110146692.0 | 申请日: | 2021-02-03 |
公开(公告)号: | CN112779226A | 公开(公告)日: | 2021-05-11 |
发明(设计)人: | 胡迪超;马红;隋礼丽;孔令洁 | 申请(专利权)人: | 苏州博腾生物制药有限公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C12N5/071 |
代理公司: | 苏州新知行知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32414 | 代理人: | 陈勐哲 |
地址: | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 病毒 细胞培养 工艺 | ||
1.一种慢病毒贴壁细胞培养工艺,其特征在于:其包括以下步骤:
S1将HEK293T细胞在装有VP-SFM培养基和低浓度的胎牛血清的培养装置中进行适应性驯化培养;
S2步骤S1驯化培养良好的HEK293T细胞建立细胞库;
S3将对数生长期的HEK293T细胞接种至细胞工厂;
S4 在四质粒系统中,对HEK293T细胞进行转染;
S5转染50~100h后,收获细胞培养上清液,即可获得细胞活力达85%以上、转染上清滴度5×106 TU/mL以上的慢病毒细胞。
2.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺,其特征在于:所述的步骤S1中,胎牛血清的浓度为0.5%~1.5%。
3.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺,其特征在于:所述的步骤S3中,HEK293T细胞接种至细胞工厂时的细胞接种密度为2×104~6×104/cm2。
4.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺,其特征在于:步骤S3中的细胞工厂为Nunc的CF-2细胞工厂。
5.根据权利要求1所述的慢病毒贴壁细胞培养工艺,其特征在于:步骤S4中,使用PEIpro法转染HEK293T细胞,PEIpro:DNA按1:1进行转染。
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