[发明专利]一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法

权利要求书

1.一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：构建针对大鼠KCNQ1基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3，sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3的靶点特异性序列分别如：SEQ ID NO .1、SEQ ID NO .2和SEQ IDNO .3所示；

S2：将S1中所述sgRNA与Cas9核酸酶体外转录成mRNA，之后将所述mRNA注射到大鼠受精卵中，再移植入代孕大鼠，获得F0代大鼠；

S3：对获得的F0代大鼠中尾部基因进行鉴定，对F0代大鼠血清甲状腺激素指标的检测，对F0代大鼠心电图数据进行采集并与预设指标进行分析，获得KCNQ1基因敲除大鼠模型；

S1中所述sgRNA的构建方式为：利用pCR-Blunt II-TOPO作为载体骨架，选择药物筛选抗性为Kanamycin，启动子为U6，构建三条KCNQ1基因的sgRNAs；

所述KCNQ1基因敲除位点位于第2号外显子上，通过Crisper/cas9技术插入胸腺嘧啶造成移码突变。

2.根据权利要求1所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，S3中所述尾部基因进行鉴定过程中，PCR鉴定引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO .5所示。

3.根据权利要求1所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，S3中采用Elisa实验检测大鼠血清中甲状腺激素水平变化。

4.根据权利要求3所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，所述血清中甲状腺激素指标包括FT3、FT4和TSH。

5.根据权利要求1所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，S3中所述心电图数据通过Powerlab数据分析系统采集。

6.根据权利要求5所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，S3中将采集的心电图数据与预设指标进行分析时，将大鼠标准Ⅱ导联心电图的QT间期与预设值进行比较，并将获得的心率数据与预设值进行比较。

7.根据权利要求1所述的一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法，其特征在于，所述大鼠模型为甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型。