[发明专利]m6

权利要求书

1.m⁶A RNA甲基化含量及其甲基化相关酶和结合蛋白在制备衰老检测试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，

所述衰老检测试剂盒是通过检测m⁶A RNA甲基化含量、RNA甲基化相关酶及结合蛋白的蛋白表达量，将其作为标志物判断细胞衰老；

所述衰老包括复制性衰老和氧化应激诱导的早衰；

所述细胞是随年龄增加而逐渐衰老的细胞；

所述RNA甲基化相关酶包括RNA甲基化酶和RNA去甲基化酶。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，

所述细胞为人胚肺成纤维细胞；

所述RNA甲基化酶为METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429；

所述RNA去甲基化酶为FTO和ALKBH5；

所述RNA甲基化结合蛋白为YTHDC1、YTHDF1和YTHDF2。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，当检测到细胞中m⁶A RNA甲基化含量降低，和/或m⁶A RNA甲基化酶METTL14、WTAP和KIAA1429，m⁶A RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5以及m⁶ARNA甲基化结合蛋白YTHDC1、YTHDF1和YTHDF2中的一种或至少两种低表达，和/或RNA甲基化酶METTL3高表达或低表达，表明细胞进入衰老状态。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，当检测到细胞中所述RNA甲基化酶METTL3低表达时，表明细胞复制性衰老；当检测到细胞中所述RNA甲基化酶METTL3高表达时，表明细胞早衰。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述蛋白表达量采用相对定量分析法统计，通过蛋白条带的灰度分析，获得不同细胞表达条带的灰度值，以22PDL年轻细胞组为对照，设为1，其他细胞表达水平与22PDL年轻细胞组灰度值相比较；蛋白和内参表达量通过Western blot检测获得；

所述22PDL年轻细胞组的定义为：继代培养细胞最终的群体倍增水平PDL为22的细胞，PDL的计算公式为n＝3.32(logN2-logN1)+X，其中N2为该代细胞收获的细胞总数，N1为上代接种的细胞数，X为上代细胞的PDL。

7.一种衰老检测试剂盒，其特征在于，包括细胞中m⁶A RNA甲基化定量检测试剂、和/或检测甲基化酶METTL3、METTL14、WTAP、KIAA1429、去甲基化酶FTO和ALKBH5以及m⁶A RNA甲基化结合蛋白中至少一种的蛋白表达量检测试剂。

8.根据权利要求7所述的衰老检测试剂盒，其特征在于，

所述的蛋白表达量检测试剂为Western blot半定量检测试剂。

9.权利要求7或8所述的衰老检测试剂盒在非治疗诊断检测衰老中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括取待测细胞，提取总RNA，采用上述衰老检测试剂盒进行m⁶A RNA甲基化含量检测的步骤，或者将待测细胞提取总蛋白，采用上述衰老检测试剂盒进行蛋白半定量的步骤。