[发明专利]一种制备新型溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L的方法

权利要求书

1.一种离心挤压剪切的类囊泡技术用于制备新型溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L的方法，其特征为步骤如下：

(1)制备细胞外膜上镶嵌VSV-G蛋白的293T细胞，我们将此细胞命名为293T-VSV-G细胞，所述VSV-G蛋白的DNA序列如SEQ ID NO:19所述，所述VSV-G蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:20所述；

(2)293T-VSV-G细胞过夜培养，然后向293T-VSV-G细胞接种腺病毒Ad5sPVRCD137L，继续培养，然后收集细胞；腺病毒Ad5sPVRCD137L可以表达可溶性蛋白sPVRCD137L，该蛋白的一端是可以结合TIGIT的PVR蛋白，另一端是可以结合CD137的CD137L蛋白；

(3)使用培养基、PBS或者其他缓冲液重悬收集的感染腺病毒之后的293T-VSV-G细胞，将细胞悬液利用离心挤压剪切的方法挤压细胞剪切通过孔径为10μm、5μm、1μm的膜滤纸；

(4)收集挤压后的病毒悬液，将病毒悬液加入带有15％、20％和40％碘克沙醇垫层的离心管中，100000×g离心一段时间，收集新型类囊泡病毒所在密度梯度带；

(5)透析液透析去除杂质，获得新型类囊泡病毒。

2.如权利要求1所述的一种类囊泡技术用于制备新型溶瘤病毒EM/VSV-GAd5sPVRCD137L的方法，其特征为：所述可溶性蛋白sPVRCD137L的DNA序列如SEQ ID NO:6所述，所述可溶性PVRCD137L的蛋白序列如SEQ ID NO:1所述；所述制备的新型溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L其内部为腺病毒Ad5sPVRCD137L，外面为类囊泡膜包裹层、且膜上有VSV-G蛋白。

3.如权利要求2所述的一种类囊泡技术用于制备新型溶瘤病毒EM/VSV-GAd5sPVRCD137L的方法，其特征为：所述可以结合TIGIT的PVR蛋白，在与TIGIT结合之后能阻断PVR-TIGIT免疫检测点通路；所述可以结合CD137的CD137L蛋白，在与CD137结合之后能活化CD137介导的免疫共刺激通路。