[发明专利]一种生物分子检测方法

权利要求书

1.一种生物分子检测方法，其特征在于：所述检测方法包括蛋白质体外结合试验检测、免疫共沉淀检测和基因检测；

所述蛋白质体外结合试验检测包括蛋白-蛋白之间的相互作用研究和RNA/DNA结合蛋白与其靶RNA/DNA之间相互作用研究，所述蛋白-蛋白之间的相互作用研究检测方法，包括以下步骤:

Step01：准备相关检测仪器，包括生物分子互作分析仪；

Step02：构建GST-靶蛋白融合表达载体；

Step03：MS检测融合蛋白的表达；

Step04：获取总蛋白裂解液；

Step05：应用生物分子互作分析仪，进行蛋白质体外结合实验调取互作结合蛋白；

Step06：对结合蛋白进行纯化与分析，得到检测结果；

Step07：对实验检测器械进行清洗，对检测环境进行清理。

所述RNA/DNA结合蛋白与其靶RNA/DNA之间相互作用研究检测方法，包括以下步骤：

Step11：准备相关检测仪器，包括生物分子互作分析仪；

Step12：进行RNA/DNA生物素探针的制备；

Step13：进行细胞裂解液的制备；

Step14：获取总蛋白裂解液；

Step15：RNA/DNA Pull down调取互作结合蛋白；

Step16：对结合蛋白进行纯化与分析，得到检测结果；

Step17：对实验检测器械进行清洗，对检测环境进行清理。

所述免疫共沉淀检测方法，包括以下步骤：

Step21：以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育；

Step22：基于上述Step21，形成免疫复合物；

Step23：对上述免疫复合物中加入能够与靶蛋白抗体结合的protein A/G，形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体”复合物；

Step24：将免疫复合物经纯化后进行凝胶电泳分离；

Step25：基于上述Step24，结合Western blot或质谱技术，对蛋白质进行纯化、并检测抗原或抗体。

所述基因检测方法，包括探针法检测、MassARRAy法检测和Illumina BeadXpress法检测，所述探针法检测的检测方法，包括以下步骤：

Step31：进行相关检测对象的DNA提取；

Step32：对提取的DNA进行样品质量检测；

Step33：进行检测探针的设计与合成；

Step34：进行预实验，获得相应的实验基本数据；

Step35：进行荧光定量PCR仪的检测；

Step36：完成检测，进行数据分析，获得检测结果。

所述MassARRAy法检测的检测方法，包括以下步骤：

Step41：进行检测样品的准备；

Step42：进行样品完整性的检测以及样品的预处理；

Step43：进行引物设计与合成；

Step44：基于上述Step43，进行PCR扩增、纯化、延伸或转录裂解；

Step45：对上述Step44完成的检测样品进行点样和质谱分析；

Step46：获得检测结果。

所述Illumina BeadXpress法检测的检测方法，包括以下步骤：

Step51：进行基因芯片的定制；

Step52：进行基因样品准备，并对准备样品进行质量检测；

Step53：将样品利用检测仪器进行上机检测；

Step54：对获得的检测数据进行分析；

Step55：获得检测结果。

2.根据权利要求1所述的一种生物分子检测方法，其特征在于，所述蛋白质体外结合实验是在体外条件下检测蛋白质间相互作用的方法，通过SDS-page电泳分析，结合MS检测，验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种生物分子检测方法，其特征在于，所述蛋白质体外结合实验是体外验证/寻找互作蛋白的技术，采用标签抗体来检测。

4.根据权利要求1所述的一种生物分子检测方法，其特征在于，所述蛋白质体外结合实验用生物素标记RNA/DNA探针，与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA/DNA—蛋白质复合物。