[发明专利]一种防治植物病毒病的方法

说明书

本发明公开了一种防治植物病毒病的方法，具体地，采用海洋甾醇提取物联合抗病毒药剂防治，本发明还涉及天然海洋甾醇提取方法的优化。联合用药结果表明，0.75ug的海洋甾醇联合1‑3mg抗病毒药剂能够最大程度地抑制番茄斑萎病毒，达到充分抑制和防治病毒的效果。

技术领域

本发明属于农作物抗病毒药剂的提取的应用方法，具体涉及防治植物病毒病制剂的提取及应用方法。

背景技术

番茄斑萎病毒(TSWV)是一种有害生物，因首先在染病番茄上发现而命名，番茄斑萎病毒的分布范围很广，可侵害160种双子叶植物与10种单子叶植物，因感染该病毒而发生的作物疾病称为斑萎病。可系统侵染番茄、辣椒、烟草、心叶烟、百日草、莴苣等，目前尚未育出抗TSWV的专用品种。

天然甾醇类药物是天然植物体内的甾醇类提取成分，具有不同程度的抗病毒活性，有望成为新一代植物抗病毒药剂，现有技术中已有从海洋生物中提取天然甾醇的方法，本发明将对现有技术的提取方法进一步优化，并拓展其抗病毒的适用范围。

发明内容

本发明的目的在于：提取天然海洋甾醇提取物，并开发天然海洋甾醇提取物在防治植物病毒病中的应用。

本发明一方面涉及一种防治植物病毒病的方法：

(1)向患病番茄施用抗病毒药剂；

(2)向步骤(1)的番茄继续施用天然甾醇提取物；

优选地，所述抗病毒药剂为BTH或宁南霉素；

优选地，天然甾醇提取物的浓度为0.75ug/ml，施用量为1ml/ 株；

优选地，抗病毒药剂的施用量为1-3mg/株；

优选地，步骤(2)中施用天然甾醇提取物的时间为施用抗病毒药剂的1h后。

优选地，所述天然甾醇提取物的提取方法为：

(1)取海洋植物5kg，干燥获得干粉；

(2)采用正丁烷溶液浸提冻干粉，并以一定比例的氯仿-甲醇溶剂洗脱，得化合物一、二的混合物；

(3)将化合物一、二的混合物通过硅胶柱分离，并用乙酸乙酯- 正己烷分离洗脱；

(4)调整氯仿-甲醇比例洗脱，得到化合物三、四，并用二氯甲烷-丙酮洗脱；

(5)再次调整氯仿-甲醇比例，得到化合物五、六，并用二氯甲烷-丙酮洗脱分离。化合物一～六即为天然海洋甾醇。

优选地，步骤(2)、(4)、(5)中氯仿-甲醇的比例分别为 10:1,20:1,15:1；

优选地，步骤(3)乙酸乙酯-正己烷比例为1:3；

优选地，步骤(4)(5)中二氯甲烷-丙酮的比例为1:2,1:3；

优选地，海洋生物可为海带、珊瑚、海裙菜。

优选地，化合物一～五的结构如下所示，其中化合物一R1＝H， R2＝OH,化合物二R1＝OH,R2＝H,化合物三R1＝R2＝H,化合物四 R1＝OAc,R2＝H,化合物五R1＝OH,R2＝H。

化合物六的结构如下所示：

有益效果

本发明采用天然海洋甾醇提取物和化学药剂联合防治番茄病毒病，相比单一药剂的防治效果更好，且能够一定程度上降低化药对农作物的副作用和污染。

本发明对海洋甾醇的提取方法进行了进一步参数优化，提高了提取和分离效果。