[发明专利]一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒及提取方法。所述试剂盒的试剂包括：裂解液、磁珠液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液和核酸洗脱液。所述方法包括样本中加入磁珠液和裂解液裂解、漂洗液漂洗、核酸洗脱液洗脱后得细菌核酸。本发明基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒提取操作简便，不含酚氯仿等有毒试剂，可实现手工操作，可整合各种自动化核酸提取仪，步骤简便，只需要加入样品，不需加蛋白酶K，即可自动提取获得核酸，在最大程度上简化了实验操作步骤和保证了实验人员的安全。满足医院临床样本较多时对核酸提取速度和通量的需求和对核酸提取质量的要求；同时本发明的试剂盒毒性低、操作简便、样本通量高、核酸提取效果更佳。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于磁珠法快速提取细菌核酸的试剂盒及提取细菌核酸的方法。

背景技术

目前市场上有许多细菌基因组提取的方法或者试剂盒，主要方法包括传统的加热煮沸的方法、Chelex-100抽提法、SDS-NaOH方法、SDS-酶裂解方法、CTAB方法、试剂盒离心柱法。

但是这些方法目前存在一些问题，包括步骤较复杂、试剂种类较多、含酚氯仿等有毒试剂、提取效率较低等。

发明内容

为此，本发明提供一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒，以解决现有技术中提取细菌核酸步骤复杂，试剂种类多、酚氯仿等有毒试剂、提取效率较低等问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明一方面提供一种基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒，所述试剂盒的试剂包括裂解液、磁珠液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液和核酸洗脱液。

进一步的，所述裂解液包括：3-6mol/L胍盐、5-20％十二烷基硫酸钠、20-200mmol/L乙二胺四乙酸、10-100mmol/L三羟甲基氨基甲烷、100-1000mmol/L氯化钠、0.5％-5％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和表面活性剂。

进一步的，所述表面活性剂为TritonX-100、Tween-20、Tween-80、PEG4000或NP-40中一种或几种。

进一步的，所述去蛋白漂洗液含有1-3mol/L胍盐、100-1000mmol/L氯化钠和体积比为80％的乙醇。

进一步的，所述去盐漂洗液为体积比为60-80％的乙醇。

进一步的，所述核酸洗脱液含有5-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷。

本发明第二方面利用基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒的手工提取细菌核酸的方法，所述方法包括：

步骤一，样本离心处理得悬浮样本；

步骤二，所述悬浮样本中加入磁珠液和裂解液，涡旋混匀30s，磁力架1min吸附，弃上清；

步骤三，加入500μL的去蛋白漂洗液，涡旋混匀30s，磁力架吸附1min，弃上清；

步骤四，加入800μL的去盐漂洗液，涡旋混匀30s，磁力架吸附1min，弃上清；

步骤五，加入100μL的核酸洗脱液，65℃水浴加热10min洗脱核酸，即得提取的细菌核酸。

本发明第三方面利用基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒的自动化提取细菌核酸的方法，所述方法包括：

步骤一，将基于磁珠的快速提取细菌核酸的试剂盒中的试剂加入到预分板中，1、7列加入500μL去蛋白漂洗液，2、8列加入300μL裂解液，3、9列加入800μL去盐漂洗液，6、12列加入100μL核酸洗脱液；

步骤二，将200μL样本溶液加到预分板2、8列中；

步骤三，将预分板放入自动核酸提取仪中，运行程序，即得提取的细菌核酸。