[发明专利]用于检测扬麦系列小麦赤霉病抗性的KASP引物组及应用

权利要求书

1. 用于检测扬麦系列小麦赤霉病抗性的KASP引物组，其特征在于，所述KASP引物组包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物1，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物3。

2.如权利要求1所述用于检测扬麦系列小麦赤霉病抗性的KASP引物组在小麦赤霉病抗性检测中的应用。

3.如权利要求1所述KASP引物组所特异性扩增的分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用是指，以所述KASP引物组为引物，待测小麦基因组DNA为模板进行PCR扩增，然后利用多功能酶标仪检测PCR扩增产物并进行基因分型，若分型结果显示待测小麦基因分型与扬麦4号相同，则该待测小麦含有等位基因G；反之，则待测小麦含有等位基因A；含有等位基因G的小麦赤霉病抗性高于含有等位基因A的小麦。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增是指：

PCR反应体系：浓度为30 ng/μL的待测小麦DNA模板2μL、引物工作液0.08 μL、KASPMaster Mix 2.5μL，以无菌超纯水补充至5 μL；

所述引物工作液制备方法如下：浓度为100 μM的引物1 12μL 、浓度为100 μM的引物212μL 、浓度为100 μM的引物3 30μL，以无菌超纯水补充至100 μL；

PCR反应程序；第一步，95℃预变性15 min；第二步，95℃变性20 s、65–57℃ 60 s，每个循环下降1℃，共9个循环；第三步，95℃变性20 s、57℃复性1 min，32个循环。

6.一种用于检测扬麦系列小麦赤霉病抗性的PCR检测试剂盒，该PCR检测试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物1，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物3。

7.如权利要求6所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述PCR检测试剂盒组分为：浓度为30 ng/μL的待测小麦DNA模板2μL、引物工作液0.08 μL、KASP Master Mix 2.5μL、无菌超纯水补充至5 μL；

所述引物工作液制备方法如下：12μL浓度为100 μM的引物1 、12μL浓度为100 μM的引物2、30μL浓度为100 μM的引物3，以无菌超纯水补充至100 μL。