[发明专利]一种解脲支原体感染的诊断标物及其对应的检测试剂盒的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种解脲支原体感染的诊断标物及其对应的检测试剂盒的制备方法与应用，诊断标物为含有UUR10_0579蛋白抗原决定簇位点的多肽，其氨基酸序列如序列1所示。发明通过定量ELISA检测病原体相关特异性抗体，具有快捷简便、高通量、结果重复性高的优点；其次UUR10_0579蛋白是解脲支原体早期感染的重要抗原，参与机体的免疫应答，因此可以将其作为解脲支原体感染的特异性诊断标志物。相比于目前临床上用于检测解脲支原体的方法，本发明提供的解脲支原体感染的检测方法具有早期、快速、敏感、特异、准确等优点，弥补了目前临床检测方法的缺陷。该检测方法的结果判定客观，操作简便，既适合大规模筛查试验，有能用于解脲支原体感染的最后的确诊诊断。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种解脲支原体感染的诊断标物及其对应的检测试剂盒的制备方法与应用。

背景技术

解脲支原体(M.urealyticum，UU)亦称溶脲脲原体，是六种脲原体属中的一种，与人类泌尿生殖道感染有密切关系。菌体微小，仅为大肠杆菌的五分之一，是目前已知的最小、最简单的具有自我繁殖能力的原核生物。UU主要分布在人体的泌尿生殖道，是除沙眼衣原体外最常见的非淋性尿道炎的病原菌。其侵犯女性生殖道黏膜细胞引起阴道炎、宫颈炎，继续上行感染，吸附于输卵管黏膜，致使其纤毛脱落，上皮损害，可出现输卵管炎、子宫内膜炎等，还可通过母婴垂直传播引起宫内感染从而导致流产、死胎、早产、新生儿呼吸道感染等不良后果。男性感染后会引起前列腺炎、附睾炎、尿道炎症等。

近年来，解脲支原体感染引起的非淋球菌性尿道炎已成为最常见的性传播疾病，且发病率呈上升趋势，因此，解脲支原体的检测在泌尿道系统疾病的诊断上具有重要意义。

目前临床上用于检测解脲支原体的方法主要有：培养法、PCR法、免疫学方法等。培养法是传统的“金标准”方法，特异性高，但敏感性低、培养时间长、易污染等缺点因而限制了其在临床上的使用。PCR法具有敏感性、特异性高等特点，在临床诊断上具有优越性，但是需要特殊的仪器和专门的人员操作，在基层医院中难以推广。免疫学方法具有快速、简便和易于标准化等优势，在临床快速检测上具有很好的应用前景。但临床上用于检测解脲支原体的主要免疫学方法(金标法和荧光抗体法)具有一定的局限性。目前国内间接法检测支原体抗体应为定性试剂，但是由于支原体在人群中广泛存在，正常人也有低滴度抗体水平，因而不能仅依靠抗体定性检测来进行诊断；此外，单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原的影响因素较多，如涂片时没有取到细胞成分、固定时细胞成分丢失也可以造成假阴性结果。因而需要一种灵敏、快速、精确定量的检测方法。

酶联免疫吸附实验(ELISA)为多种病原体，包括病毒、细菌、真菌和支原体等，最常用检测方法，具有操作简便、检测准确性高等特点，在临床和疾控中广泛应用。传统定性或者半定量ELISA价格便宜，为目前基层医院、疾控中心首选检测方法。随着临床检验技术的发展，定量ELISA具有更高准确性，更能反应患者机体免疫水平，在临床上逐步开展应用。

UUR10_0579蛋白为一种新的糖基转移酶，分子量为37kDa,可催化合成糖脂，且是解脲支原体早期感染的重要抗原，参与机体的免疫应答。因而可以通过对UUR10_0579蛋白的特异性抗体进行定量检测来对解脲支原体感染进行早期诊断。

发明内容

本发明的目的是提供一种解脲支原体感染的诊断标物及其对应的检测试剂盒的制备方法与应用，建立一种新的解脲支原体检测技术，能够早期客观、灵敏和稳定地诊断解脲支原体感染。

本发明这种解脲支原体感染的诊断标物为含有UUR10_0579蛋白抗原决定簇位点的多肽，其氨基酸序列如序列1所示。

本发明这种解脲支原体感染的诊断标物制备检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

S1采用实验生物信息学软件分析UUR10_0579蛋白的氨基酸序列，预测并确定该UUR10_0579蛋白上的抗原决定簇位点，通过人工合包含该抗原决定簇位点的多肽，多肽的氨基酸序列如序列1所示；