[发明专利]基于基因沉默的褐飞虱防控基因Nach-like的dsRNA片段及其用途

权利要求书

1.褐飞虱Nach-like基因dsRNA，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所述。

2.权利要求1所述的褐飞虱Nach-like基因dsRNA的用途，其特征是：褐飞虱的Nach-like基因dsRNA引发的基因沉默对褐飞虱存在致死效果。

3.权利要求1中所述的褐飞虱Nach-like基因dsRNA的克隆方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）NCBI数据库中获得褐飞虱Nach-like序列，其序列ID为XM_022348347.1；利用Primer5软件设计引物，得到正向引物、反向引物；以反转录得到的cDNA作为模板，通过PCR扩增得到目标产物片段；

正向引物：AGTAAGAATCCAGCCTCAGT

反向引物：AGCAAGGAACAACCAGTAGA；

（2）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，对目的条带切割回收纯化；

（3）回收纯化后将产物连接在pCE2-TA/Blunt-Zero载体上，转入DH5α感受态细胞中，涂于具有Amp抗性的筛选培养基上，挑取阳性单菌落于具有Amp抗性的液体LB培养基中，进行测序；

（4）将测序结果通过NCBI数据库进行Blast，得到含有褐飞虱Nach-like基因dsRNA目的序列的质粒。

4.根据权利要求3中所述的褐飞虱Nach-like基因dsRNA的克隆方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将含有褐飞虱Nach-like基因dsRNA目的序列的质粒用带有T7启动子序列的dsRNA引物进行PCR扩增；

所述引物为：

TAATACGACTCACTATAGGGAGTAAGAATCCAGCCTCAGT

TAATACGACTCACTATAGGGAGCAAGGAACAACCAGTAGA

（2）PCR扩增产物纯化后即为dsRNA体外转录的模板。

5.权利要求1中所述的褐飞虱Nach-like基因dsRNA的使用方法，其特征在于：对褐飞虱进行dsRNA的饲喂。