[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌液态原药的制备方法

说明书

本发明涉及到解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)1841菌株，以及该菌发酵生产所产生的具有植物抑菌活性、促生长性发酵产物的原药分离制备方法。所述分离纯化方法包括以下步骤：(1)前处理：向所述含有抑菌物质的发酵液中加入防腐剂，添加比例为0.5‑2g/L，使用有机酸将pH调整至2‑6；(2)分离：将步骤(1)经前处理的含有抑菌物质的发酵液经膜过滤得到液态原药，滤余液为分离出的芽孢杆菌菌体，可以加溶剂及填料进行喷雾干燥。

技术领域

本发明属于利用有益微生物对植物病害进行生物防治的领域，具体涉及到解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)1841菌株，以及该菌发酵生产所产生的具有植物抑菌活性、促生长性发酵产物的原药分离制备方法。

背景技术

植物病害病原物是能侵染寄生于植物体并导致侵染性病害发生的生物。多为异养型的非专性寄生物。病原物虽具有致病能力，但不是形成植物病害的决定因素，更不是唯一的因素。能否导致发病，还决定于寄主植物、病原物和环境条件三者相互作用的结果，通常引起植物病害的病原物包括由生物引起，有传染性，病原体多种，如真菌、细菌、病毒、线虫或寄生性种子植物等，而解淀粉芽孢杆菌所产生的抑菌物质主要针对细菌、真菌性植物病害。

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)属于细胞生物，细菌界，厚壁菌门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，是枯草芽孢杆菌的一个亚种，菌落呈白色，半透明状，光滑湿润，杆状，革兰氏阳性菌。抑菌促生的作用机理主要包含分泌抗菌物质、产生拮抗作用、营养空间竞争、诱导寄主产生抗性和促进植物生长等。

解淀粉芽孢杆菌在生长过程中会产生多种抑菌物质及植物促生物质，如抑菌物质表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)、丰原素(Fengycin)等，而这些通过非核糖体途径合成的分子量小、稳定型号、耐受蛋白酶水解及有机溶剂作用的脂肽类抗生素，在生物防治中应用于细菌、真菌、病毒、线虫的抑制起到主要作用。

同时，解淀粉芽孢杆菌可以产生如赤霉素、促生物质PGRs：反式玉米素(T-zeatin)、吲哚乙酸(IAA)、S-诱抗素(ABA)等生理活性物质，促进植物根系及植株生长，增强植物抗病性，从而间接减少病害发生。

目前，解淀粉芽孢杆菌菌剂原药通常为固体菌剂，是在发酵液中菌体芽孢化后进行制备，其主要生产目标为具有活性的芽孢杆菌芽孢，其制备方法均为将发酵液添加保护剂后进行喷雾干燥，喷雾在高温条件下进行，未针对发酵液中已产生的活性物质进行单独处理。经过喷雾干燥，以上活性物质(多为蛋白、多肽类大分子物质)失活，在原药中失去相应的抑菌和促生作用，影响成品菌剂作用，可以说是一种浪费。

因此，有必要提供一种芽孢杆菌液态原药的分离方法，将抑菌、植物促生原药的分离纯化。

发明内容

本发明提供一种芽孢杆菌液态原药的分离方法，具体是一种发酵法生产抑菌、植物促生原药的分离纯化方法，通过精制处理，能够使抑菌、促生物质与菌体分离，制备成为单独的液体抑菌剂、促生菌剂原药，菌体可单独制作喷粉。此外，分离纯化条件温和，分离纯化过程环保，有利于此液态原药的产业化生产。

本发明提供以下方案：

一种芽孢杆菌液态原药的分离制备方法，所述分离纯化方法包括以下步骤：

(1)前处理：在膜过滤前，向所述含有抑菌物质的发酵液中加入防腐剂，添加比例为0.5-2g/L；加入有机酸，将pH调制2-6；

(2)分离：将步骤(1)经前处理的含有抑菌、促生物质的发酵液经膜过滤得到液态原药；

(3)菌体收集：将步骤(2)分离剩余的过滤余液进行收集，用于喷雾干燥制备芽孢杆菌菌粉，因相当于进行了菌体浓缩(体积缩减60％-75％)，喷雾干燥所需时间和能耗均减少。