[发明专利]一种多酶复合体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将CvFAP-linker–SpyTag重组蛋白和TLL-linker-SpyCatcher重组蛋白在胞外混合，进行自组装，得到TLL-CvFAP多酶复合体；

所述CvFAP-linker-SpyTag重组蛋白中的CvFAP的核苷酸表达序列如SEQ ID NO.1，所述linker的氨基酸序列为(EAAAK)₂，所述的SpyTag的核苷酸表达序列如SEQ ID NO.3；和/或所述CvFAP-linker-SpyTag重组蛋白是由包括以下步骤的方法构建的CvFAP-linker-SpyTag重组蛋白工程菌表达得到：

1)以pET28a-CvFAP为模板，以SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6为引物，经过PCR扩增和PCR产物纯化后，进行转化，获得pET28a-CvFAP-linker-SpyTag阳性质粒；

2)将获得的阳性质粒转化到表达宿主细胞中，得到CvFAP-linker-SpyTag重组蛋白工程菌；

所述TLL-linker-SpyCatcher重组蛋白中的TLL的核苷酸表达序列如SEQ IDNO.2，linker的氨基酸序列为(GGGGS)₂，SpyCatcher的核苷酸表达序列如SEQ ID NO.4；和/或所述TLL-linker-SpyCatcher重组蛋白是由包括以下步骤的方法构建的TLL-linker-SpyCatcher重组蛋白工程菌表达得到：

1)以pET28a-TLL为模板，以SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8为引物，扩增得到含有Not I和Sal I酶切位点的质粒pET28a-5’Sal I-TLL-3’Not I；

2)然后以pET23a-SpyCatcher为模板，以SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10为引物，扩增得到含有5’Sal I-linker-SpyCatcher-3’Not I的基因片段；将该基因片段和质粒pET28a-5’Sal I-TLL-3’Not I分别使用Not I/Sal I酶切后，经PCR产物纯化后，进行连接和转化，获得阳性质粒；

3)将获得的阳性质粒转化到表达宿主细胞中，得到TLL-linker-SpyCatcher重组蛋白工程菌。

2.根据权利要求1所述的TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌。

3.根据权利要求2所述的TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌是大肠杆菌BL21(DE3)。

4.根据权利要求1所述的TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，自组装时间为10-13小时；和/或自组装时的pH为6.0-8.0。

5.根据权利要求4所述的TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，自组装时的pH为7.0±0.4；和/或自组装时的温度为30±5摄氏度。

6.根据权利要求5所述的TLL-CvFAP多酶复合体的构建方法，其特征在于，自组装时的pH为6.8-7.2，自组装时的温度为30±2摄氏度。

7.根据权利要求1-6任一项所述构建方法得到的TLL-CvFAP多酶复合体。

8.权利要求7所述的TLL-CvFAP多酶复合体作为催化剂在油脂生产烷(烯)烃中应用。

9.一种油脂生产烷(烯)烃的方法，其特征在于，使用的催化剂为权利要求7所述的TLL-CvFAP多酶复合体。