[发明专利]一种总同型半胱氨酸测试卡

说明书

本发明提供了一种总同型半胱氨酸测试卡，包括上盖、底座和总同型半胱氨酸检测试纸，其中，上盖设有一个加样孔，底座设有一个检测孔，总同型半胱氨酸检测试纸由从上往下依次层叠的过滤层、还原层、滤血层、氧化层和反应层组成；还原层经过含有二硫键还原剂的还原层处理液浸泡并干燥处理；氧化层经过含有二硫化物和磷酸盐的氧化层处理液浸泡并干燥处理；反应层经过反应层处理液浸泡并干燥处理；与现有技术相比，本发明的总同型半胱氨酸测试卡不需要用户进行样本预处理步骤、且能消除过量的解离剂对过氧化氢产物的影响,可检测人体血液或尿液样本中的总同型半胱氨酸。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种总同型半胱氨酸测试卡。

背景技术

同型半胱氨酸(HCY)是一种含硫4碳α-氨基酸，来源于食物中的甲硫氨酸和半胱氨酸代谢产生的中间产物，其本身不参与蛋白质的合成。甲硫氨酸在S-腺苷甲硫氨酸合成酶催化下与ATP结合形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，SAM在甲基转移酶的作用下供出甲基后，变成S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)，SAH水解形成同型半胱氨酸和腺苷。

正常情况下同型半胱氨酸主要经过再甲基化途径和转硫基途径代谢，可释放到细胞外。再甲基化途径：在甲硫氨酸合成酶的作用下，以维生素B12为辅酶，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，同型半胱氨酸获得甲基再形成甲硫氨酸，同型半胱氨酸的再甲基化途径在肝细胞内进行；脱转硫基途径：在胱硫醚-β-合成酶的作用下，以维生素B6为辅酶，同型半胱氨酸和丝氨酸合成胱硫醚，后者在胱硫醚-γ-裂解酶作用下分解为半胱氨酸和α-酮丁酸，α-酮丁酸进一步代谢生产葡萄糖。同型半胱氨酸的两种代谢途径各占50％左右，同型半胱氨酸的代谢受甲硫氨酸浓度、关键酶的活性及一些辅酶因子等因素的影响。

因同型半胱氨酸中的游离巯基具有高度活性，极易与含巯基蛋白或氨基酸形成二硫键。血液中同型半胱氨酸主要以三种形式存在：约70％-80％的同型半胱氨酸以二硫键与血浆蛋白结合，白蛋白是同型半胱氨酸的主要载体，其余的则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-胱氨酸化合物形式存在，只有约1％的同型半胱氨酸呈游离状态。血浆中结合形式和游离形式的同型半胱氨酸统称总同型半胱氨酸(tHCY)，tHCY水平代表这细胞内HCY的代谢状态。正常人血液中tHCY水平很低，成人空腹血浆tHCY参考值一般在5～15μmol/L。

酶功能障碍、维生素的缺乏、肾功能不全、肝病、糖尿病、系统性红斑狼疮、甲状腺功能低下、恶性肿瘤、恶性贫血、银翘病、器官移植、药物、肥胖症、吸烟等均可导致tHCY的升高。血浆高HCY水平是诱发心血管病及其他动脉粥样硬化性血管疾病等的重要危险因子。

目前检测总同型半胱氨酸的方法有很多，包括高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、化学发光法、生化法，其中临床应用最广泛的为生化法(水解酶循环法和胱硫醚循环法)。这些方法中或需要借助价格昂贵的大型仪器进行检测如高效液相色谱法(需借助液相色谱仪)、化学发光法(需借助自动化学发光分析仪)、生化法(需借助自动生化分析仪)，或操作复杂繁琐如酶联免疫吸附法，以上方法均不能满足基层医院检验场所对快速便捷检测的需求。

为了解决基层医院检验场所对快速便捷检测的需求，公开了以下方法：一种定量测定同型半胱氨酸的电化学试纸及其制备方法(专利申请号CN201410103865.0)；一种用于同型半胱氨酸检测的电化学传感器的制备方法(专利申请号CN201510802844.2)；一种快速检测同型半胱氨酸的电化学方法(专利申请号CN201911315069.2)；一种同型半胱氨酸干化学法检测试纸条及其制备方法(专利申请号CN200810113922.8)。这些检测方法具有结构简单、操作方便的特点，但上述方法未见对结合性HCY进行解离的反应步骤或结构，只能检测血液样本中游离的HCY的含量，而不能检测tHCY含量，因游离的HCY只占tHCY的1％，这导致其缺乏临床敏感性，因此无法应用到临床诊断中。