[发明专利]一种装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途

说明书

本发明属于RNA药物技术领域，涉及一种装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途。所述的复合颗粒在水凝胶内部包封脂质体，在所述的脂质体内部包封所述的核酸，所述的核酸为DNA或RNA的整体或片段。利用本发明的装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途，能够使制备得到的复合颗粒在用于肿瘤，尤其是胰腺癌的免疫增效治疗时，具有更好的治疗效果。

技术领域

本发明属于RNA药物技术领域，涉及一种装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途。

背景技术

胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤，手术、放化疗等传统治疗手段对于胰腺癌患者生存周期的延长十分有限，而且增加了患者对药物的毒性反应。近些年来，肿瘤免疫治疗技术的发展为改善胰腺癌患者预后开拓了一种全新的途径和方法。但是，免疫治疗存在明显的个体差异，如何提高免疫治疗的应答率及降低免疫治疗的系统毒性，已经成为目前肿瘤免疫治疗的关键问题。

胰腺癌肿瘤免疫微环境中，免疫细胞多数处于数量与功能的失衡状态，通常表现为具有免疫抑制作用的肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)、调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)和髓源性抑制细胞(Myeloid derived suppressorcells,MDSCs)功能活跃且大量存在；而通常表现为具有抗肿瘤作用的CD4+、CD8+效应T细胞、NK细胞和DC细胞数量减少，并呈现无功能或不成熟的表型和状态。而肿瘤微环境中免疫抑制细胞是影响肿瘤发生及预后的关键因素。

肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)根据活化状态和发挥功能不同，可分为M1型即经典活化型巨噬细胞(classically activated macrophage)和M2型即替代活化型巨噬细胞(alternatively activated macrophage)。M1型巨噬细胞主要参与炎症反应和抗肿瘤免疫过程；M2型巨噬细胞表现为刺激血管形成，降解细胞外基质，促进肿瘤发生远端转移。此外，调节性T细胞(Tregs)能够分泌抑制性细胞因子(TGF-β、IL-10等)抑制效应T细胞的活化和功能，介导肿瘤相关抗原免疫耐受，使肿瘤细胞逃避免疫监视。研究表明，在胰腺癌肿瘤的转移及复发过程中，M2表型的TAMs以及Tregs数量显著增加，是预后差的重要指标。因此，通过药物促进肿瘤微环境中M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞的极化，以及降低Tregs细胞数量，重塑肿瘤免疫微环境，有望成为提高胰腺癌预后的一种有效方法。

研究表明，IRF5在巨噬细胞的极化中具有重要的调控作用，能够将M2型巨噬细胞重新极化成M1型巨噬细胞，从而抑制肿瘤发生和转移。此外，趋化因子配体5(CCL5)是一类调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子，又称为活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)。CCL5/CCR5的相互作用可能以多种方式促进肿瘤的发生，刺激血管生成，调节细胞外基质，诱导补充基质细胞和炎症细胞及参与免疫逃逸机制。因此，提高肿瘤微环境中IRF5的表达量以及降低CCL5的表达量，促进M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化，降低Tregs的招募，重塑肿瘤免疫微环境，有助于降低胰腺癌发生和转移。

RNA(如mRNA)作为基因传递分子，携带遗传信息，指导蛋白质合成，对蛋白质的翻译效率进行上调或下调，解决蛋白“不可成药”难题。近些年来，基于RNA(mRNA、siRNA)的药物在癌症免疫治疗中的应用越来越广泛。但是，RNA极易被环境中富含的核酸酶降解从而失去活性。因此，需要一种载体将RNA输送到靶点避免其被降解。

阳离子脂质体制备简单、可重复转染和易降解等特点被认为具有重要的临床应用价值。其中DOTAP阳离子脂质体是一种应用较多的非病毒载体系统，能够将RNA包封于脂质双分子层中，保护RNA免受核酸酶降解并输送至靶点部位。