[发明专利]一种适于常温运输的RNA提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种适于常温运输的RNA提取试剂盒，其特征在于，其包括裂解结合液，磁珠悬液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液；

所述裂解结合液含有如下组分：浓度为2M的异硫氰酸胍、浓度为1M的硫氰酸钠、0.05M的三羟甲基氨基甲烷、0.01M的亚氨基二琥珀酸四钠、质量分数为0.10%的抗坏血酸钠、质量分数为0.5%的甜菜碱、质量分数为5%的吐温20、浓度为0.2M的乙酸钠、质量分数为45%的异丙醇；

所述磁珠悬液由以下成分组成：固含量20-40mg/mL的超顺磁性氧化硅纳米磁珠，所述超顺磁性氧化硅纳米磁珠的粒径介于200-500nm，分散于无核酸酶水中，磁珠悬液pH=4.0-6.0；

所述第一洗涤液由以下成分组成：20-200mM的三羟甲基氨基甲烷、1-50mM的亚氨基二琥珀酸四钠、100-500mM的乙酸钠、0.1-2%的吐温20、体积分数40-60%的乙醇；

所述第二洗涤液为体积分数60-80％乙醇；

所述洗脱液由以下成分组成：1-10mM的亚氨基二琥珀酸四钠、1-100mM的tris-HCl缓冲液、0.01-0.2%的DEPC。

2.根据权利要求1所述的适于常温运输的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬液的固含量为25mg/mL；所述第一洗涤液由以下成分组成：100mM的三羟甲基氨基甲烷、10mM的亚氨基二琥珀酸四钠、140mM的乙酸钠、0.50%的吐温20、55%的乙醇；所述第二洗涤液为70％无水乙醇；所述洗脱液由以下成分组成：1mM的亚氨基二琥珀酸四钠、10mM的tris-HCl缓冲液、0.010%的DEPC。

3.一种使用权利要求1或2所述的RNA提取试剂盒从样本中提取病毒核酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）样本准备：取采样拭子样本浸泡于生理盐水中，充分震荡混匀后，静置2-5min，然后800-12,000rpm离心，制成病毒样本保存液；

（2）样本裂解及核酸吸附：取300-500μL病毒样本保存液用于检测；向步骤（1）的病毒样本保存液中加入1-2倍体积的裂解结合液，同时加入15-40uL的磁珠悬液，混匀后置于磁力架上，静置，待磁珠完全吸附后用弃去液体，得吸附后磁珠；

（3）漂洗：向步骤（2）所得磁珠中加入550-650 μL第一次洗涤液，震荡混匀后置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体，保证无液体残留；再加入550-650μL第二次洗涤液震荡混匀后置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体，保证无液体残留；

（4）样本洗脱：向步骤（3）所得漂洗后磁珠中加入550-650 μL的洗脱液，震荡混匀后置于磁力架上，待磁珠吸附后，收集洗脱液即为所得的核酸溶液，-80℃保存。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，采用32通道自动核酸提取仪进行提取。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，采用32通道自动核酸提取仪进行提取的方法为：在获得病毒样本保存液后，按照如下步骤操作：

步骤1：在深孔板1/7列加入裂解结合液400-500uL，病毒样本300-500uL病毒样本保存液，磁珠悬液15-40uL；提取仪设置为：混合15min，混合速度为快速，磁吸时间60s，不开启加热；

步骤2：在深孔板2/8列加入第一洗涤液550-600uL；提取仪设置为：混合2min，混合速度为中速，磁吸时间60s，不开启加热；

步骤3：在深孔板3/9列加入第二洗涤液 550-600uL；提取仪设置为：混合2min，混合速度为中速，磁吸时间60s，不开启加热；

步骤4：在深孔板4/10列加入洗脱液55-60uL；提取仪设置为：等待6min后，混合10min，混合速度为慢速，磁吸时间90s，不开启加热。