[发明专利]一株分泌维生素B6

说明书

一株分泌维生素B₆单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明分泌维生素B₆单克隆抗体杂交瘤细胞株MTB，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19183。首先合成维生素B₆半抗原，再制备维生素B₆完全抗原，免疫BALB/c小鼠，取高效价、低IC₅₀小鼠脾细胞，通过PEG方法与骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株MTB。此细胞株分泌的单克隆抗体，对维生素B₆具有较好的特异性和检测灵敏度。

技术领域

本发明涉及一株分泌维生素B₆单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

维生素B₆代表一组具有高生物利用度的3-羟基-2-甲基吡啶衍生物，包括吡哆醇，吡哆醛，吡哆胺及其磷酸化形式。维生素B₆参与氨基酸，碳水化合物和脂质代谢中的多种酶促反应。此外维生素B₆在神经系统功能，激素功能，血红蛋白合成中起重要作用。有趣的是，最近发现维生素B₆偶联物是靶向协同癌症治疗中的潜在药物载体，人类无法在体内合成维生素B₆。因此，仅能从膳食，补充剂和肠道菌群中获取维生素B₆。维生素B₆存在于多种食物中，包括家禽，小麦，坚果，鱼，牛奶，蔬菜和番茄中。尽管维生素B₆缺乏症并不常见，但在某些特殊情况下维生素B₆缺乏的风险很高。维生素B₆缺乏会引起多种症状，例如抑郁，易怒，疲劳，发炎和贫血。为了预防和治疗维生素B₆缺乏症，市面上有各种维生素B₆强化食品和补充剂。因此，可靠地确定膳食及补充剂中的维生素B₆含量是必需的。

目前，维生素B₆含量分析方法主要是仪器方法及微生物法，最常用的定量分析技术有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气质联用(GC-MS)、液质联用(LC-MS)等。尽管仪器方法准确，灵敏，但这些方法需要昂贵的仪器、专业的操作人员，复杂的提取步骤，成本高，时间长，不适用于在短时间内筛查大量测试样品。微生物法基于样品或标准品中维生素B₆存在时微生物的生长，从而检测维生素B₆含量。尽管微生物法具有高灵敏度和特异性，但其较长的孵育时间(通常20-24小时)和复杂的步骤限制了目标物的快速检测。因此建立快速简便的维生素B₆检测方法具有重要意义。

作为一种有效的替代方法，免疫测定方法如酶联免疫吸附测定(ELISA) 具有简单，低成本和高效的优点，使其快速实现筛选目的。目前，使用免疫测定法同时检测几种分析物引起了越来越多的关注。

发明内容

本发明的目的是提供一株分泌维生素B₆单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的抗体对维生素B₆具有较高的检测灵敏度，可以用来建立维生素B₆的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一种分泌维生素B₆单克隆抗体杂交瘤细胞株MTB，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19183。

一种维生素B₆单克隆抗体，其由所述CGMCC No.19183的杂交瘤细胞株MTB分泌产生。

维生素B₆半抗原的制备方法，化学反应方程式如下：