[发明专利]一种嗜热栖热菌光裂合酶及其提取方法与应用

权利要求书

1.一种嗜热栖热菌光裂合酶的提取方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）嗜热栖热菌菌体与磷酸盐缓冲液混合，然后采用高压均质机进行菌体破碎，其中，压力为400~800bar，均质1~2次，得到破碎液；

（2）将步骤（1）制得的破碎液加入过滤介质过滤或者直接高速离心，得到清液；

（3）将步骤（2）制得的清液通过肝素柱进行进一步分离纯化，得到耐热栖热菌光裂合酶；

步骤（1）中所述的嗜热栖热菌菌体，通过如下方法制得：

将嗜热栖热菌种子液接种至发酵培养基中进行培养，然后离心收集菌体，得到嗜热栖热菌菌体；

所述的发酵培养基包含基础发酵培养基和结冷胶，其中，结冷胶用量为基础发酵培养基质量的0.1~0.5‰；所述的基础发酵培养基中每升包含如下组分：0.9%（w/v）乳清粉、4 g硫酸铵、10 g氯化钠、15 mg氯化钙、123 mg七水硫酸镁、1.5 g磷酸二氢钾、9 g十二水磷酸氢二钠、6 ml微量元素；

步骤（3）中所述的分离纯化的具体操作为：

1）采用pH=6.8的20mM磷酸盐缓冲液平衡肝素柱；

2）柱子平衡后，将步骤（1）制得的清液上样；

3）上样后，采用pH=6.8的20mM磷酸盐缓冲液平衡3~5个柱体积至基线走平，调零；

4）采用含0.2M NaCl、pH=6.8的20mM磷酸盐缓冲液进行洗杂，至基线走平，然后采用含0.4M NaCl、pH=6.8的20mM磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集洗脱液。

2.根据权利要求1所述的嗜热栖热菌光裂合酶的提取方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的磷酸盐缓冲液为含1mM EDTA、pH=6.8的50mM磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的嗜热栖热菌光裂合酶的提取方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的嗜热栖热菌菌体与磷酸盐缓冲液的质量体积比为1kg：（3~5L）。

4.根据权利要求1所述的嗜热栖热菌光裂合酶的提取方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的过滤介质为硅藻土545。

5.根据权利要求1所述的嗜热栖热菌光裂合酶的提取方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的高速离心的条件为20000rpm离心20min。