[发明专利]同时测定桃果实中半纤维素和纤维素的检测方法

说明书

本发明公开了一种同时测定桃果实中半纤维素和纤维素的检测方法，其步骤包括:分别测定纤维素酶溶液及半纤维素酶溶液的单糖或多糖特征峰；取纤维素标样加入纤维素酶溶液反应，取半纤维素标样加入半纤维素酶反应，HPLC检测，计算得出半纤维素对应的特征峰面积的标准曲线A的公式以及纤维素水解产生的葡萄糖特征峰面积的标准曲线D的公式；取桃果实的果肉，用淀粉酶处理，然后离心取沉淀物；沉淀物中同时加入纤维素酶溶液和半纤维素酶溶液，反应后HPLC检测，根据公式A计算得到半纤维素含量，根据公式D的计算得到纤维素含量。本发明可同时水解纤维素和半纤维素，并分别推算出纤维素和半纤维素的含量。步骤简单，检测结果可靠。

技术领域

本发明涉及到一种同时测定桃果实中半纤维素和纤维素的检测方法。

背景技术

纤维素与半纤维素共同存在于大多数植物细胞壁中。纤维素全部由葡萄糖单位聚合而成，而半纤维素是一种杂聚多糖，常含有木糖，甘露糖，半乳糖，鼠李糖，阿拉伯糖等单糖单位。在酸性环境下半纤维素远较纤维素易于水解。半纤维素比纤维素的分子要小，大约含有500到3000个单糖单位，后者大约含有7000到15000个。半纤维素是分支的聚糖，而纤维素是不分支的。半纤维素具有亲水性能，可以造成细胞壁的润胀。

现行所有标准中关于纤维素和半纤维素检测和定量的方法是使用硫酸重铬酸钾氧化-硫酸亚铁滴定的氧化还原滴定法及由美国国家可再生能源实验室(NREL)开发的采用两步酸水解系统分析纤维中3大组分质量分数的方法。重铬酸钾法先在低温下使用高浓度硫酸将纤维转化为低聚糖,然后在高温下使用稀酸将低聚糖进一步转化为单糖,通过分析单糖确定纤维素和半纤维素的量,并且通过对酸水解液采用UV检测确定酸溶木质素的质量分数。然而，重铬酸钾有剧毒，硫酸危险性较大，且桃果实中成分复杂，含有酚类等易被氧化物质，均可被硫酸重铬酸钾氧化而对纤维素的测定产生干扰，因此，此方法不适用于桃果实中纤维素的检测。美国国家可再生能源实验室(NREL)的方法需要先烘干样品水分，还需要依次用浓硫酸和稀酸两部水解，同时需要高温加热，热处理时间长。

中国专利文献CN101726565A-乳制品中微晶纤维素的检测方法及其应用公开了一种利用纤维素酶水解奶制品中的纤维素并测定含量的方法。但桃果实与乳制品不同，含有纤维素、半纤维素、淀粉等多糖。纤维素酶很难提纯，市面上销售的纤维素酶含有淀粉酶和半纤维素酶等，水解桃果肉样品时对淀粉和半纤维素的水解具有不可控性，无法准确根据水解产物计算纤维素含量，因此此方法不适合桃果实中纤维素、半纤维素的测定。

纤维素水解产物为葡萄糖，半纤维素水解产物为包含葡萄糖在内的多种糖，因此同时水解纤维素与半纤维素的产物中的葡萄糖不能直接用来推算纤维素含量。

目前，桃果实中分别检测纤维素和半纤维素的方法尚为空白，同时检测纤维素和半纤维素的方法更属首创。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种同时测定桃果实中半纤维素和纤维素的检测方法，从而弥补桃果实中纤维素、半纤维素检测方法的空白。

本发明采用的技术方案为：

一种同时测定桃果实中半纤维素和纤维素的检测方法，其步骤包括:

(1)排除酶溶液本身对HPLC结果的干扰：用HPLC法分别测定纤维素酶溶液以及半纤维素酶溶液的单糖或多糖特征峰；

(2)制作标准曲线及同时水解计算纤维素、半纤维素含量公式的获得：取纤维素标样加入与步骤(1)中浓度相同的纤维素酶溶液反应，取半纤维素标样加入与步骤(1)中浓度相同的半纤维素酶反应，然后分别进行HPLC检测，检测结果去除步骤(1)中酶溶液本身对HPLC结果的干扰后，计算得出半纤维素对应的特征峰面积的标准曲线A的公式：Y₁＝(X₁-a₁)*b₁/100*10/M