[发明专利]一种复合微生物除臭剂及其制备方法

权利要求书

1.一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述复合微生物除臭剂及其制备方法包括以下步骤：

S1:原始菌种采集和培养∶从陕西秦岭山区天然林的山上或原始森林土壤中采集原始菌种；

S2:从步骤S1中采集到的菌种中进行菌种分离；

S3:从样品中称取10g土壤，装入盛有250mL无菌水的三角瓶中；振动20min，以使土壤中的微生物充分且均匀地分布于液体中；

S4:好氧菌用好氧三角瓶装，厌氧菌用厌氧三角瓶装；从三角瓶中取出0.5mL原始液按十倍稀释度作一系列稀释；

S5:再从每一稀释度中取0.5mL稀释液接种于含有4.5mL培养基的试管中；从前4个稀释度中各取0.2mL液体分别滴入改良高氏培养基平皿、PDA平皿中，用玻璃刮刀推匀；放于30℃培养分离中温细菌、放线菌、真菌和酵母菌，50℃下培养分离耐高温或嗜热微生物；

S6:将采集来的样品按30％的接种量加入新鲜猪粪中，反复富集至猪粪无臭化；以无臭猪粪为起始菌种添加到模拟有机垃圾中(接种量30％)，进行驯化培养，再从处理后的模拟垃圾中取样；

S7:以牛肉膏蛋白胨、高氏一号、高氏二号、马丁氏等为培养基，采用划线法或系列稀释法在25℃下分离中温细菌、放线菌、真菌、酵母菌，在50℃下分离耐高温或嗜热微生物；模拟垃圾组成∶蔬菜50％，米饭15％～25％，肉类5％～25％，添加稻壳10％作为疏松剂；

S8:称取样品1g，加无菌水5ml充分振荡打散，制成悬浊菌液，然后悬浊菌液与液体培养按1∶5比例装入40x180mm的大试管中，在液面上加一层灭菌的液体石蜡形成厌氧，置温度28～30℃，光照强度为2000Lux进行厌氧培养，三天后培养液明显呈深红色；后以培养液进行琼脂平板划线分离、纯化；

S9:取来步骤S8中的培养液，并向其内部加入加入经过滤灭菌的NaHCO₃；5.0/50mL水；

S10:然后在培养基表面用灭菌液体石蜡表│面，培养条件同上，三天后出现红色小菌落，六天后单菌落生长良好，挑取单菌落重复分离，直到得到纯单菌落；

S11：取除臭性能好的菌种，然后对其进行繁殖培养，培养出母液之后，开始进行大规模的制备；

S12：取来发酵罐，向发酵罐的内部加入浓度为95％葡萄糖溶液，并开启发酵罐内部的高温消毒功能，对发酵罐的内部进行消毒杀菌；再取来步骤S11中筛选出来的经过繁殖培养的菌种种子液，将其加入到发酵罐的内部进行培养；

S13：向步骤S12中的发酵液中加入植物芳香精油、活性炭吸附颗粒，搅拌混合均匀之后，将发酵罐内部的溶液进行密封灌装即可制成微生物除臭剂。

2.如权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，采样应根据筛选的日的、微生物分布情况、菌株的主要特征及其生态关系等因素，确定具体的时间、环境和目标物，观察到陕西秦岭山区的许多原始森林和其植被丰富的山上积满了落叶，厚厚的落叶在地表形成了腐烂的落叶层，但山上流出的山泉和山下的小溪依然清澈干净，可能腐烂植物中存在着净化能力很强的微生物。

3.如权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述步骤S8中，平板培养基成分如下∶NH4Cl1.0g，K2HPO4，0.5g，MgCl2，0.2g，NaCl2.0g，酵母膏0.1g，琼脂18～30g，水1000ml,灭菌后，然后再进行无菌操作。

4.如权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述步骤S13中，接种的种子液的总量为母液的1～5％左右，发酵培养，当菌数过到1×107个/ml数量级时即可停止发酵生产。

5.如权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述步骤S10中，此法共分离到厌氧细菌18株，具有光合作用的，属于水圈微生物的一类强除臭能力厌氧细菌，随后进行除臭定性测试。

6.如权利要求1所述的一种复合微生物除臭剂及其制备方法，其特征在于：所述步骤S9中，也可以加入50mL经过滤灭菌的乙醇或戊醇或4％氨酸，用过滤灭菌的0.1L，P0，调pH至7.0，趁热进行倒平板，待平板凝固后，在平板表面进行划线。