[发明专利]一种外周血cfDNA提取前的纯化方法

说明书

本发明涉及血液纯化技术领域。本发明提供了一种外周血cfDNA提取前的纯化方法，将血液用去白细胞过滤器过滤后进行离心，离心后再提取cfDNA。本发明的纯化方法在采血后用去白细胞过滤器进行过滤，降低血液中的白细胞数量，减少因白细胞破坏而释放大量gDNA对实验结果产生的干扰。相对于现有的通过保护白细胞，降低其在运输过程中的死亡破裂以减少gDNA干扰的实验方法，本申请的方法在采血后即去除白细胞，从根源上解决因白细胞在运输过程中死亡破裂释放gDNA而产生干扰的问题。

技术领域

本发明涉及血液纯化技术领域，尤其涉及一种外周血cfDNA提取前的纯化方法。

背景技术

精准医疗是未来医学的主流，特别在肿瘤的检验筛查以及胚胎遗传性疾病的筛查等方面，外周血的肿瘤细胞或胚胎细胞核酸分析给人类提供了一个无创而方便的检验方法。此方法的关键之一是如何有效提高外周肿瘤细胞或胚胎细胞核酸片段，从而提升检测的灵敏度和特异性。外周血中的cfDNA保留了来自孕妇胚胎以及肿瘤脱落细胞或坏死细胞中的遗传信息，提取这些核酸片段并且进行基因检测，已经成为精准医疗中的不可或缺的技术之一。

而目前由于技术和设备等条件因素，无法在基层医疗单位进行cfDNA提取和检测处理，必须集中运送到特定医疗机构如第三方实验室等大型实验室进行实验，在抽血后经运送和储存过程中，血中白细胞会发生死亡和破损，大量白细胞中的gDNA释放到血中，造成之后肿瘤细胞或胚胎细胞核酸分析的干扰。在抽血和提取cfDNA段的同时，如何避免血液中健康白细胞破坏所造成的染色体核酸gDNA的大量释放和干扰，影响目标核酸片段的检测精准度和特异性，是目前技术开发的重点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种外周血cfDNA提取前的纯化方法，从根源上解决因白细胞在运输过程中死亡破裂释放gDNA而产生干扰的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种外周血cfDNA提取前的纯化方法，将血液用去白细胞过滤器过滤后进行离心，离心后再提取cfDNA。

作为优选，所述过滤时血液流速为5～7mL/min。

作为优选，，所述血液在采血后立即进行过滤。

作为优选，，所述离心时离心力为2400～2600g。

作为优选，，所述离心时离心的时间为8～12min。

作为优选，所述cfDNA从离心后的上层血浆中提取。

本发明提供了一种外周血cfDNA提取前的纯化方法，将血液用去白细胞过滤器过滤后进行离心，离心后再提取cfDNA。本发明的纯化方法在采血后用去白细胞过滤器进行过滤，降低血液中的白细胞数量，减少因白细胞破坏而释放大量gDNA对实验结果产生的干扰。相对于现有的通过保护白细胞，降低其在运输过程中的死亡破裂以减少gDNA干扰的实验方法，本申请的方法在采血后即去除白细胞，从根源上解决因白细胞在运输过程中死亡破裂释放gDNA而产生干扰的问题。

附图说明

图1为实施例2的方法和离心分离法、化学处理保存法的实验比较结果。

具体实施方式

本发明提供了一种外周血cfDNA提取前的纯化方法，将血液用去白细胞过滤器过滤后进行离心，离心后再提取cfDNA。

在本发明中，所述过滤时血液流速优选为5～7mL/min，进一步优选为6mL/min。

在本发明中，所述血液优选在采血后立即进行过滤。

在本发明中，所述离心时离心力优选为2400～2600g，进一步优选为2450～2550g，再进一步优选为2500g。