[发明专利]用于检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的引物探针组合、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及用于检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的引物探针组合、试剂盒及方法。本发明提供用于希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的分别或同时实时荧光定量RT‑PCR检测的引物探针组合，其含有三对特异性引物和三条特异性探针，其中，所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.1‑6所示，所述特异性探针的序列如SEQ ID NO.7‑9所示。本发明提供的引物探针组合和检测方法具有较高的特异性和灵敏性，可重复性好，检测简便、快速具有实际应用价值。在新的人兽共患病不断出现的形势下，本发明在疾病的早发现、早诊断方面尤显重要意义。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及用于检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的引物探针组合、试剂盒及方法。

背景技术

目前汉坦病毒在全世界分布广泛，在人类中可以引起两种疾病。一种是肾综合征出血热(HFRS)，主要由汉坦病毒(HTNV)和亚洲相关病毒引起，欧洲的普乌拉病毒(PUUV)和多布拉病毒(DOVB)，以及世界范围的汉城病毒(SEOV)；另一种则是汉坦病毒肺综合征(HCPS)，由辛诺姆布雷病毒(SNV)和北美相关病毒引起，以及安第斯病毒(ANDV)和拉丁美洲相关病毒，引起全球广泛关注。

希望山病毒(Prospect Hill virus，PHV)、穆勒舒病毒(Muleshoe virus，MULEV)和里约塞贡多病毒(Rio Segundo virus，RIOSV)都属于属于布尼亚病毒目汉坦病毒科，是一种有包膜的单股负链RNA病毒，其基因组包括L、M、S三个节段，来源于S、L和M片段的多核苷酸分别编码病毒核衣壳蛋白、核糖核酸依赖性核糖核酸聚合酶和糖蛋白前体。

希望山病毒最初是在美国马里兰州弗雷德里克捕获的草地田鼠肺组织中分离出来的，但是感染并不局限于田鼠，而是在美国本土野生啮齿类动物中广泛存在，其3′端核苷酸序列类似于汉坦病毒和普马拉维病毒，表明希望山病毒和普马拉维病毒的结构蛋白(Gl、G2和N)相似。穆勒舒病毒(Muleshoe virus，MULEV)是由Rawlings等人在1996年德克萨斯州北部的鼠类动物中发现。里约塞贡多病毒最初是Hjelle等人在1995年哥斯达黎加中部的动物中被描述的，相关文献报道来自啮齿类动物的汉坦病毒可能比其他汉坦病毒更易于宿主转换，极有可能造成来自一个主要宿主的外溢而在多个物种中传播。它们都属于新世界汉坦病毒，某些新世界汉坦病毒可引起汉坦病毒肺综合征(HPS)，HPS引起的汉坦病毒被美国研究所列为A类病原体，全球每年发生超过50，000例病例，死亡率40％(HPS)，虽然目前并没有发现这三种病毒感染人，但是啮齿类动物传播迅速，并不能排除感染人的可能性。

病毒病实验室检测主要依靠于病毒分离、血清学检测和病毒核酸检测。病毒核酸检测主要是基于PCR技术，实时荧光定量RT-PCR有着快速、高灵敏度和特异度的优点，是目前运用较多的实验室检测方法。该方法基于荧光共振能量迁移的原理，通过对荧光强度变化监测产物量的变化，随着反应时间的进行，将监测到的荧光信号的变化绘制一条曲线。该方法全程闭管操作，降低了污染的风险；对PCR产物除了可以进行定性分析，也可通过绘制标准曲线进行定量分析。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏、特异，可分别或同时检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的实时荧光定量RT-PCR引物探针组合、试剂盒及方法。