[发明专利]一种肺癌类器官专用培养基及培养方法

说明书

本发明提供一种肺癌类器官专用培养基及培养方法，该培养基包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括：GSK429286A；Y27632；EGF；BMP4；Human FGF4；胰岛素‑转铁蛋白‑硒(Insulin‑Transferrin‑Selenium)；B27；全反式维A酸(all‑trans retinoic acid)；KGF；DAPT；GlutaMAX；R‑Spondin‑1；CHIR99021；8‑Br‑cAMP；牛血清白蛋白(BSA)；磷酸二酯酶(PDEs)抑制剂。本发明的培养基可实现肺癌类器官的快速生长，并可长期稳定培养，形成的肿瘤类器官细胞球球形规则，且大小较为均一，能在体外很好地保留患者肿瘤组织的异质性。

技术领域

本发明属于类器官培养技术领域，具体涉及一种肺癌类器官专用培养基及培养方法。

背景技术

肺癌是威胁人类健康和生命安全的恶性肿瘤之一，世界范围内每年约有100万-300万人死于肺癌。在我国肺癌也成为威胁人类生命的首位恶性肿瘤，每年死亡人数约为60万，且有逐年增加的趋势。尽管近年随着分子生物学的发展，研究者利用各种肺癌细胞系在肺癌的发病机制及治疗等方面取得了突破性进展，但由于遗传背景的差异，不同患者发病的分子机制及治疗均存在个体化的特点。目前，肺癌的个体化治疗基于三个层面：临床学、分子学和细胞学；其中细胞学层面因素是通过检测肿瘤细胞的药敏结果来确定，但因细菌药敏和肿瘤细胞系药敏与临床应用价值差异较大，故急需建立新的体外替身药敏模型来根据临床情况选择合理化综合治疗方案，从而使患者得到更好的治疗或者治愈。

通过肿瘤患者自体的肿瘤组织培养的原代肿瘤胞能表现出肿瘤原来的特性，是肿瘤在体外研究的重要手段。类器官是一种3维细胞培养物，包含其来源组织的一些关键特征；肺癌组织的类器官培养是指从肺癌患者体内取出的肿瘤组织进行培养，由于培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能、分化及药物治疗等研究。然而目前国内在建立肺癌类器官培养方法的研究技术存在空白，主要问题在于肺癌类器官的专用培养体系开发存在难度。如果能够成功研究出肺癌类器官的培养技术，将为肺癌患者药物研发、药敏检测与药物筛选提供理想的体外模型，无疑会给我国肺癌患者带来诸多福音。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种肺癌类器官专用培养基及培养方法以解决上述问题。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种肺癌类器官专用培养基，包括基础培养基和特异性添加因子；所述特异性添加因子包括：GSK429286A；Y27632；表皮细胞生长因子(EGF)；骨形态发生蛋白4(BMP4)；人成纤维细胞生长因子4(Human FGF4)；胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium)；B27；全反式维A酸(all-trans retinoic acid)；角质细胞生长因子(KGF)；(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)；GlutaMAX；R-Spondin-1；CHIR99021；8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)；牛血清白蛋白(BSA)；磷酸二酯酶(PDEs)抑制剂。

进一步地，所述特异性添加因子包括以下终浓度的组分：GSK429286A，2-20μM；Y27632，2-20μM；EGF，10-500ng/ml；BMP4，10-500ng/ml；Human FGF4，50-1000ng/ml；Insulin-Transferrin-Selenium，0.5-2x；B27，0.5-3x；all-trans retinoic acid，0.1-1μM；KGF，10-500ng/ml；DAPT，2-20mM；GlutaMAX，0.5-2x；R-Spondin-1，100-1000ng/ml；CHIR99021，1-20μM；8-Br-cAMP，10-200nM；BSA，0.1％－1％；PDEs抑制剂，10-200nM，前述的百分比为质量百分比。