[发明专利]植物光系统I多克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种植物光系统I多克隆抗体及其制备方法。本发明设计光系统I相关蛋白的抗原表位以及合成的相应的KLH偶联多肽，以该系列偶联多肽作为免疫原免疫动物获得相应的抗体，用于ELISA法检测植物光系统I相关蛋白的检测试剂，实现了光系统I相关蛋白的全检测和精确定量检测，有利于对光系统I的深入研究。

技术领域

本发明属于检测用抗体制备技术领域，具体涉及一种植物光系统I多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

光系统是进行光吸收的功能单位，是由叶绿素、类胡萝卜素、脂和蛋白质组成的复合物。包括光系统I（ PSI）和光系统II（PSII），每一个光系统含有两个主要成分：捕光复合物和光反应中心复合物。这两个光系统是以串联的方式协同作用的。PSI的光化学反应是长光波反应，其主要特征是NADP⁺的还原。PSII的光化学反应是短光波反应，其主要特征是水的光解和放氧，夺取水中的电子供给PSI。

PSI由光能吸收、传递和转化所需的一系列蛋白质和结合在这些蛋白上的色素分子及电子传递链组分组成，涉及的蛋白主要有PsaA蛋白、PsaB蛋白、PsaC蛋白、PsaD蛋白、PsaE蛋白、PsaF蛋白、PsaG蛋白、PsaH蛋白、PsaJ蛋白、PsaK蛋白、PsaL蛋白、PsaN 蛋白、PsaO蛋白、Ptac8/PsaP蛋白，PsaA蛋白和PsaB蛋白结合形成异二聚体的反应中心，PsaC蛋白、PsaD蛋白、PsaE蛋白构成 PSI的外周蛋白，PsaL蛋白、PsaK蛋白、PsaF蛋白、PsaJ蛋白为膜内在蛋白，PsaN 蛋白、PsaO蛋白蛋白的功能目前还未完全研究清楚。在进行光系统I蛋白研究时，常常要需要对提取的光系统蛋白亚基的种类和含量进行测定，传统的测定方法是采用单一蛋白提取并测定的方法，费时费力，且测定结果不准确，采用抗原抗体进行蛋白检测的方法是一种较为精确的方法，但是，需要制备相应的标准抗体，目前，针对光系统I蛋白检测用抗体的报道非常少，常见的为亚基蛋白全蛋白免疫制备的抗体，这些抗体的专一性和灵敏性均不强，交叉反应太多，检测结果不可靠，且目前还未有针对光系统I全部种类蛋白检测的抗体，阻碍了对于光系统I的深入研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种植物光系统I多克隆抗体及其制备方法。

一种光系统I抗原表位，所述抗原表位包括来自PsaA蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；来自PsaB蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:2所示；来自PsaC蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示；来自PsaD蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示；来自PsaE蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示；来自PsaF蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示；来自PsaG蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:7所示；来自PsaH蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:8所示；来自PsaJ蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:9所示；来自PsaK蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:10所示；来自PsaL蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:11所示；来自PsaN 蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:12所示；来自PsaO蛋白的抗原表位，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:13所示。

优选的，在抗原表位氨基酸序列中不含有半胱氨酸的抗原表位末端加半胱氨酸。加入半胱氨酸的目的为增强KLH蛋白与抗原表位多肽的偶联性能，增强免疫原性。

一种光系统I多克隆抗体的制备方法，按照如下步骤进行：

（1）抗原的合成：按照所述光系统I抗原表位的氨基酸序列，人工合成抗原多肽，在不含有半胱氨酸的抗原表位末端加半胱氨酸；

（2）将抗原多肽联到具有强免疫原功能的KLH蛋白上并用PBS稀释后，得到抗原溶液；