[发明专利]用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒实时荧光定量PCR鉴别的引物组

说明书

本发明提供用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒实时荧光定量PCR鉴别的引物组，所述引物的序列如SEQ ID NO.1‑4所示，本发明建立能够同时对鸭1型腺病毒(DAdV‑1)和鸭4型腺病毒(DAdV‑4)进行检测和精准定量的实时荧光定量PCR方法具有很高的特异性和灵敏度。当前国内外尚未见用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒实时荧光定量PCR鉴别的引物组研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

技术领域

本发明提供一种用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒实时荧光定量PCR鉴别的引物组及其试剂盒，属于动物传染病学领域。

背景技术

实时荧光定量PCR方法(Real time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质检测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。实时荧光定量PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系。双重实时荧光定量PCR是一种特殊的荧光定量PCR形式，其突出的特点是一次实时荧光定量PCR反应可同时检测两种病原，对病原复杂或存在多种基因型的病原鉴别检测十分有效。

根据国际病毒分类委员会(ICTV)分类，腺病毒科Adenoviridae下设5个属，分别为富AT腺病毒属Atadenovirus、禽腺病毒属Aviadenovirus、鱼腺病毒属Ichtadenovirus、哺乳动物腺病毒属Mastadenovirus和唾液酸酶病毒属Siadenovirus。其中富AT腺病毒属有5个种，分别为牛腺病毒D型Bovine adenovirus D、绵羊腺病毒D型Ovine adenovirus D、袋鼠腺病毒A型Possum adenovirus A、蛇腺病毒A型Snake adenovirus A和鸭腺病毒A型Duckadenovirus A(也称鸭1型腺病毒，Duck adenovirus 1，DAdV-1)(该属的代表种)。

鸭4型腺病毒(duck adenovirus 4，DAdV-4)是2019年在我国南方地区发现一种鸭新型腺病毒病。对该病毒基因组进行分析发现，其主要基因编码蛋白均和鸭群中前期发现的鸭1型腺病毒、鸭2型腺病毒和鸭3型腺病毒相关基因的核苷酸和氨基酸同源性均低于80％。遗传进化分析表明，DAdV-4属于腺病毒科(Adenoviridae)禽腺病毒属(Aviadenovirus)，但处于一个独立的遗传进化分支，将其命名为鸭4型腺病毒(duckadenovirus 4，DAdV-4)。2020年，本研究团队在福建地区鸭群中也证实存在鸭4型腺病毒(DAdV-4)感染(命名为DAdV-4-FJ001株，GenBank登录号MW238795)，测定的DBP基因和鸭4型腺病毒参考株GD-2019株(GenBank登录号MN733730)核苷酸同源性为100％。流行病学研究证实，当前鸭群中存在对鸭群健康养殖危害极大的腺病毒科禽腺病毒属的两种腺病毒(DAdV-1和DAdV-4)流行，这就给疫病的鉴别诊断带来现实需求。

本发明基于鸭群中存在对鸭群健康养殖危害极大的腺病毒科禽腺病毒属的两种腺病毒(DAdV-1和DAdV-4)基因序列特征，巧妙设计用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒实时荧光定量PCR鉴别诊断的引物组，可简化操作程序、节约成本，又可快速用于开展鸭群中DAdV-1和DAdV-4相关病原学致病机理(尤其是协同致病机理)研究。当前，国内外尚未见用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒(DAdV-1和DAdV-4)实时荧光定量PCR鉴别诊断的引物组研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鸭1型腺病毒(DAdV-1)和鸭4型腺病毒(DAdV-4)实时荧光定量PCR鉴别的引物组及其试剂盒，建立能够同时对鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒进行鉴别的实时荧光定量PCR方法，该方法简化操作程序、节约成本。当前，国内外尚未见用于鸭1型腺病毒和鸭4型腺病毒(DAdV-1和DAdV-4)实时荧光定量PCR鉴别诊断的引物组研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

本发明的目的通过如下技术方案实现：