[发明专利]功能性肝实质细胞及其制备方法有效
| 申请号： | 202110082099.4 | 申请日： | 2021-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN113151147B | 公开（公告）日： | 2023-07-25 |
| 发明（设计）人： | 邓宏魁;王启明;孙达;时艳 | 申请（专利权）人： | 北京大学;北昊干细胞与再生医学研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 高丽娜 |
| 地址： | 100871*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 功能 实质 细胞 及其 制备 方法 | ||
1.功能性肝实质细胞的制备方法，其特征在于，将潜能拓展的多能干细胞，即EPS细胞，进行定向分化，从而制备功能性肝实质细胞；
其包括以下步骤：
S1：将EPS细胞在TeSRTM2培养基中进行预处理，将其诱导至早期胚胎着床后的上胚层细胞的状态；
S2：将预处理后的EPS细胞在内胚层诱导培养基中培养，获得内胚层细胞，所述内胚层细胞为FOXA2+/SOX17+的内胚层细胞；
S3：将S2获得的内胚层细胞在前肠后端细胞诱导培养基中培养，获得前肠后端细胞；
S4：将S3获得的前肠后端细胞培养，获得肝脏前体细胞，其包括以下步骤；
a.将步骤S3获得的前肠后端细胞在肝脏前体细胞诱导培养基I中进行培养，直至表达AFP蛋白；
b.将步骤S4a获得的细胞进行传代，然后切换到肝脏前体细胞诱导培养基II中进行培养，直至同时表达AFP和ALB蛋白；
c.将步骤S4b获得的细胞切换至肝脏前体细胞扩增培养基中培养，获得肝脏前体细胞EPS-HPLCs；
S5：将S4获得的肝脏前体细胞在肝细胞成熟培养基中培养，获得功能性肝实质细胞。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述前肠后端细胞诱导培养基以MCDB培养基为基础培养基。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述内胚层诱导培养基以MCDB培养基为基础培养基。
4.用于EPS细胞预处理的TeSRTM2培养基、内胚层诱导培养基、前肠后端细胞诱导培养基、肝脏前体细胞诱导培养基I、肝脏前体细胞诱导培养基II、肝脏前体细胞扩增培养基和肝细胞成熟培养基在制备用于使EPS细胞分化为功能性肝实质细胞的试剂盒中的用途。
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