[发明专利]一种用于诊断椎间盘退行性变的血清miRNA标志物及其应用

说明书

本发明提供了一种椎间盘退行性变的诊断试剂或诊断工具以及miRNA在制备所述诊断试剂或诊断工具中的应用。所述诊断工具包括用于检测miRNA表达量的所述诊断试剂，所述miRNA选自miRNA‑194、miRNA‑515、miRNA‑138、miRNA‑146中的任一种或两种以上。本发明第一次发现了对椎间盘退行性变具有较高诊断价值的生物标记物miRNA‑194、miRNA‑515、miRNA‑138、miRNA‑146；通过miRNA血清标志物诊断试剂及诊断工具的制备，有助于椎间盘退行性变的早期筛查，为临床早期诊断、提高疗效提供坚实的基础。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及诊断椎间盘退行性变的miRNA及其应用。

背景技术

椎间盘退行性变症(intervertbral disc degeneration，IDD)是中老年的常见病、多发病，严重威胁人类健康，影响正常生活工作。据统计，全世界80％人口曾罹患腰痛，其中由IDD引起腰痛占绝大多数(Rodrigues-Pinto R,Ward L,Humphreys M,et al.Humannotochordal cell transcriptome unveils potential regulators of cell functionin the developing intervertebral disc.Sci Rep.2018；8(1):12866.)。严重IDD患者，甚至引起下肢感觉障碍、大小便失禁等。IDD已成为全球致残的重要因素，且随着世界人口老龄化，IDD威胁健康的问题日益严重。早期诊断、早期治疗有助于抑制IDD进展，缓解疼痛，防止感觉障碍等神经症状出现。但是，部分患者早期症状不明显，较难明确诊断；且IDD导致的腰痛也较难与软组织炎症导致的腰痛鉴别。因此，寻找椎间盘退行性变的早期筛查、诊断的高灵敏性、特异性的血清标志物寻是目前该领域研究的重要方向，亟待解决。

人类基因组计划发现，人体内有大量的非编码序列发挥重要的生物学功能，其中microRNA(miRNA)是非编码RNA中的重要一员。miRNA为全长仅有20-24bp、高度保守、非编码的短链核苷酸片段，随着研究的深入，发现其在人体的肿瘤发生、炎症反应、退行性变等生物学过程中发挥了重要作用。miRNA特异性作用于下游靶点mRNA，进而调控人体重大疾病的发生、发展，故miRNA可作为重大疾病筛查和诊断的重要候选生物学标志物。研究发现，虽然在外周血中，miRNA含量较低，但是其性质稳定，PCR可有有效检测其含量，且miRNA含量与疾病发生、发展具有显著的相关性，故通过外周血miRNA制备疾病检测试剂盒具有有效的可行性。且外周血miRNA疾病检测试剂盒检测效率高、速度快、成本相对较低，具有较好的应用前景。因此，发现与椎间盘退行性变有显著相关性的miRNA，并将其作为miRNA生物标志物，研制相应筛查诊断试剂盒，其在椎间盘退行性变的筛查诊断中将发挥重大的意义。CN105483272A披露了miR-1249可以作为诊治椎间盘退行性病变的分子标志物。CN105420376A披露了miR-744可以作为诊治椎间盘退行性病变的分子标志物。CN105521490A披露了miRNA-888-3p可以作为诊治椎间盘退行性病变的分子标志物。但是，现有技术中披露的与椎间盘退行性变有显著相关性的miRNA生物标志物的种类较少，因此，发现与椎间盘退行性变有显著相关性的更多种类的miRNA生物标志物对椎间盘退行性变的筛查诊断将发挥重大意义。

发明内容

为了克服现有技术中披露的与椎间盘退行性变有显著相关性的miRNA生物标志物的种类较少的技术缺陷，本发明的第一个方面提供一种椎间盘退行性变的诊断试剂或诊断工具，所述诊断工具包括用于检测miRNA表达量的试剂，所述miRNA选自miRNA-194、miRNA-515、miRNA-138、miRNA-146中的任一种或两种以上。所述用于检测miRNA表达量的试剂包括探针和/或PCR引物。