[发明专利]孕妇外泌体LTF蛋白在制备胎儿先心病检测产品中的应用、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种孕妇外泌体LTF蛋白在制备胎儿先心病检测产品中的应用、试剂盒及检测方法，并进一步证实该外泌体LTF蛋白在胎儿室间隔缺损的母体血清外泌体中表达下调。利用该蛋白检测胎儿室间隔缺损不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗和预防等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及孕妇外泌体LTF蛋白在制备胎儿先心病检测产品中的应用、试剂盒及检测方法。

背景技术

先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是最常见的先天性畸形，在所有的出生缺陷中，先心病一直处于我国出生缺陷的首位，据文献报道先心病在新生婴儿中的发病率8/1000，一直以来都是婴幼儿发病率和死亡率最重要的病因。而在产前CHD发生率其实更高，在所有的先天畸形中，超过40％的产前胎儿死亡是由于先心病。然而超声确诊胎儿先心病时往往已经处于孕中晚期，给孕妇及其家属带来极大的身心伤害。

外泌体被认为是细胞之间的通讯工具，它的内容物(蛋白，RNA等)已作为潜在生物标志物广泛用于疾病研究。外泌体存在于血清、血浆、尿液等几乎所有的体液中。越来越多研究表明外泌体蛋白是十分有潜力的诊断标志物或预后生存指标。

LTF作为一线免疫介质和抗细胞凋亡的重要分子，在维持孕期子宫内稳态中起到重要的作用。LTF可以和多种小分子或生物大分子结合，如DNA、脂多糖、肝素、氨基葡聚糖以及两性电解质等。LTF能够与特定DNA序列高效特异性结合，做为转录因子参与基因的转录调控，正向调节某些细胞因子(如白介素-1)和生长因子(如转化生长因子TGF-β)的表达。

蛋白质组的定义是指一个基因组、一个或多个细胞或某些组织所表达的所有蛋白质，无论是小到一个细胞还是大到一个生物体，都是从一个整体水平去研究参与生命活动的所有蛋白质。这些所有蛋白质并不是一个一成不变的集合，而是随时随地变化着的，因为随着生命活动的进行和稳态的调节总有不同的蛋白质在被表达或修饰。蛋白质是生命活动的承担者，也是大多数生物体结构的组成部分，蛋白质的形成要经过一系列的转录后修饰，因此，从基因组和转录组并不能直接推导出蛋白质组的情况。

目前先天性心脏病领域用孕妇血清外泌体为标本进行外泌体蛋白质组学的研究很少见，随着外泌体提取技术及TMT蛋白质谱技术等高通量蛋白组技术的出现和发展，使用外泌体蛋白或者外泌体miRNA做为某种疾病的生物标志物的研究趋势越来越多。越来越多的证据表明胎儿先天性心脏病的发生和发展与母亲因素相关，与此同时，很多学者也试图寻找母体因素做为胎儿先心病的标志物未果。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供孕妇外泌体LTF蛋白在制备胎儿先心病检测产品中的应用、试剂盒及检测方法。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

本发明的第一方面提供一种孕妇血清外泌体蛋白在制备胎儿先心病检测产品中的应用，所述外泌体蛋白为LTF蛋白。

优选地，所述检测产品包括芯片或试剂盒。

优选地，所述LTF蛋白在孕妇血清中表达下调，检测的cut-off值小于97ng/ml，可预测患有先心病。

优选地，所述试剂盒包括ELISA检测试剂盒、胶体金检测试剂盒、免疫共沉淀试剂盒、化学发光试剂盒、免疫荧光试剂盒。

本发明的第二方面提供一种试剂盒，包括：包被LTF单克隆抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品(试剂盒里已有的已经确定含量的LTF蛋白)，阴性对照品(蛋白含量为0的标准品)，稀释液，酶反应终止液。

优选地，所述酶标抗体是试剂盒中的生物素化的乳铁蛋白抗体，酶的底物是试剂盒中的显色底物。

本发明的第三方面提供一种基于上述胎儿先心病检测试剂盒检测孕妇血清外泌体LTF蛋白浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：