[发明专利]斑鳢雄性分子标记引物及其应用

说明书

本发明公开了一种斑鳢雄性分子标记引物，该引物为引物对M12或引物对P2，所述引物对M12包括Contig‑1上游引物和Contig‑1下游引物，所述引物对P2包括Contig‑2上游引物和Contig‑2下游引物，各引物的核苷酸序列分别如SEQID NO：1～SEQ ID NO：4所示，该引物可对斑鳢的性别进行快速准确地鉴定。同时还提供了一种斑鳢性别鉴别的方法，该方法耗时短，效率高。以及上述引物和方法在斑鳢全雄性育种方面的应用。

技术领域

本发明属于斑鳢性别鉴定技术，具体涉及斑鳢雄性分子标记引物及其应用。

背景技术

近年来，测序技术得到迅猛发展，高通量测序成本变得越来越低。基于高通量测序技术，越来越多经济鱼类的性别标记被发现，如尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、金钱鱼(Scatophagusargus)、半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)、大刺鳅(Mastacembelusarmatus)、斑鳢(Sinipercachuatsi)以及红鳍东方鲀(Takifugurubripes)等。这些性别特异分子标记的成功开发极大加快了单性育种的发展。

斑鳢(学名：Channamaculata)属鳢科、鳢属鱼类，为淡水底层鱼类，多栖息于沿岸水草多和淤泥底质浅水区。斑鳢是典型的肉食性鱼类，幼鱼主要以桡足类、枝角类、仔鱼、水生昆虫等为食，成鱼则以各种小型杂鱼为食，包括鲫鱼、泥鳅等。斑鳢肉味鲜美、肉质白嫩、营养丰富，经济价值较高。另外，斑鳢生长存在显著的性别二态性，其雄性生长明显快于雌性。

由于雄鱼生长明显快于雌鱼，因此实现全雄斑鳢养殖将会显著提高水产养殖效益。已有研究表明乌鳢和斑鳢均属于XY性别决定型，因此，全雄斑鳢培育首先需要得到XY伪雌鱼，获得伪雌鱼的主要通过遗传雄鱼诱导性逆转的途径获得。而斑鳢很难从外部形态上区分性别，而用传统测交的方法既耗时又费力，因此需要开发稳定可靠的分子标记筛选其中的XY伪雌鱼。迄今为止，国内外虽有能够成功鉴定斑鳢遗传性别的分子标记的报道，但是主要是单核苷酸多态性标记，实际使用比较困难。

因此，开发一种简便且能准确鉴定遗传性别的分子标记在斑鳢全雄育种中具有极大的生产应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种斑鳢雄性分子标记引物，该引物能在分子水平上鉴别斑鳢性别。

本发明目的还在于提供一种利用上述引物进行斑鳢性别鉴定的方法，该方法耗时短，检测结果准确。

本发明最后一个目的在于提供斑鳢雄性分子标记引物以及斑鳢性别鉴定的方法在斑鳢鱼全雄性育种方面的应用。

为实现上述第一目的，本发明采用以下技术方案：

一种斑鳢雄性分子标记引物，所述引物为引物对M12或引物对P2，所述引物对M12包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，所述引物对P2包括Contig-2上游引物和Contig-2下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig-2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig-2下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

具体的，各引物从5’-3’的核苷酸序列如下：

Contig-1上游引物：5’-GCAAGCCAGTTTGTATGGAGTA-3’；

Contig-1下游引物：5’-CCAGAGGTGGATGTTCTTTATC-3’；

Contig-2上游引物：5’-CCTCTGTGTCCTCCCTGATAGCTC-3’；

Contig-2下游引物：5’-AAAGACCATAGCTGAGTACGGCAA-3’。