[发明专利]一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法

权利要求书

1.一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)取材，取生长良好的娃娃菜叶片流水冲洗30～60min，滤纸吸干后，85％酒精消毒2～3S，进行脱毒处理，蒸馏水冲洗，剪成(1.0-1.4)cm×(1.0-1.4)cm小方块；

2)培育，将处理后的娃娃菜组织移入基本培养基中，喷洒感染菌液，喷两次，间隔24h，第一次喷洒0.5～0.8ml,第二次喷洒2～3ml，培养室培养，在暗室内培养20～25d，室温15～20℃，产生愈伤组织；

3)分化，将愈伤组织剪碎成碎末状，接种于分化培养基上，在光照12h/d、光强2600Lx，室温20～22℃条件下，培养20～25d，诱导愈伤组织分化形成不定芽；

4)生根壮苗培养，将不定芽，垂直接种于生根壮苗培养基上；在光照12h/d、光强2000～2400Lx，室温20～22℃条件下，培养25～30d，培养出植株较大且根系发达粗壮的娃娃菜生根试管苗；

5)增殖培养，将娃娃菜生根试管苗，剪去根须垂直接种于增殖培养基，在光照12h/d、光强2000～2400Lx，室温20～22℃条件下，将娃娃菜培养20～24d；培养出所需数量的不定芽；

6)生根培养，将步骤5)中所得的不定芽，垂直接种于生根培养基上，为防止污染，在光照12h/d、光强2000～2400Lx，室温20～22℃条件下，培养15～20d，诱导出粗长发达的根系；

7)假植：将生根的试管苗在温室内炼苗5～7d，用水洗尽根部残留培养基，假植到基质上；15～20d后有新根长出；得到娃娃菜生根苗。

2.如权利要求1所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述步骤1)的脱毒处理包括冲刷与浸泡，先用冲洗液进行冲刷脱毒，然后取出放入18～20℃的浸泡液浸泡40～50min。

3.如权利要求2所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、白果提取液、皂荚提取液，其投量比为95：1:1:0.8：0.6。

4.如权利要求2所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子、黄连提取液、如意草以及蒸馏水，其投料比为15～20：2～3：20～30:1～3：1～3：2～4：40～50。

5.如权利要求1所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：步骤2)中感染菌液为将刚刚感染病菌的娃娃菜叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，于30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。

6.如权利要求5所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述感染病菌包括霜霉病与软腐病。

7.如权利要求5所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述处理剂包括艾叶提取液、金银花提取液、连翘提取液、鱼腥草提取液与蒸馏水。

8.如权利要求7所述的一种高抗病性娃娃菜组培育苗方法，其特征在于：所述艾叶提取液、金银花提取液、连翘提取液、鱼腥草提取液与蒸馏水的投量比为2～3：2～5:1～3:3～7：85～96。