[发明专利]一种表达藻胶裂解酶的载体与工程菌

说明书

本发明公开了一种表达藻胶裂解酶的载体以及重组工程菌，该重组工程菌为能表达高酶活力的藻胶裂解酶酵母菌菌株，其分泌的藻胶裂解酶可用于制备海藻寡糖。本发明还提供了上述重组工程菌的最适发酵温度和最适发酵pH值，可以更进一步提高藻胶裂解酶的产量，在工业上具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种表达藻胶裂解酶的载体与工程菌。

背景技术

海藻胶是一种L-古罗糖醛酸和D-甘露糖醛酸的线性阴离子聚合物。但由于海藻胶具有膳食纤维特性，难以被机体吸收利用，从而限制了他的应用范围。藻胶裂解酶(Alginate Lyase)已经被证明可催化海藻胶生成低聚糖，且海藻酸盐低聚糖作为添加剂广泛应用于食品、药品以及农业中。

海藻胶可以通过物理方法和化学方法来制备海藻寡糖。酶解法由于具有专一性，可控性较强的特点而被广泛研究。藻胶裂解酶作为裂解海藻胶的工具酶，探索其酶切的最适温度、最适pH值并获得高酶活力的酶至关重要。

发明内容

本发明第一个方面的目的在于，提供一种能高表达高活力藻胶裂解酶的工程菌菌株。

本发明所采取的技术方案是：通过博来霉素和营养缺陷条件同时筛选出能稳定表达藻胶裂解酶的工程菌。连续传代后，采用DNS方法从上述工程菌中筛选能表达高活力藻胶裂解酶的工程菌。

本发明的第一个方面，提供一种载体，所述载体中插入有藻胶裂解酶的表达序列。

优选地，所述藻胶裂解酶的表达序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，根据本发明第一个方面所述的载体，所述载体上还含有标签的表达序列。

优选地，所述标签为His标签。

在本发明的部分实施例中，所选用的标签为His标签。

进一步地，根据本发明第一个方面所述的载体，所述载体上还含有抗生素抗性基因的序列。

优选地，所述抗生素抗性基因为博来霉素抗性基因。

在本发明的部分实施例中，所选用的抗生素抗性基因为博来霉素抗性基因。

在本发明的部分实施例中，所述载体选用pPICZαA质粒，载体的构建方法具体方法为：通过序列合成，构建p PICZαA-AL重组质粒。

本发明的第二个方面，提供一种重组工程菌，所述工程菌中包含本发明第一个方面所述的载体。

优选地，所述重组工程菌为大肠杆菌、酵母菌。

在本发明的部分实施例中，所述重组工程菌为大肠杆菌，具体的构建方法为：将pPICZαA-AL重组质粒转化大肠杆菌，次日挑取平板上的大肠杆菌单菌落于含博来霉素的培养基中培养，并同时对菌液进行PCR检测，选取阳性菌落。

更具体地，所述培养基为LB培养基；所述培养的条件为：约37℃，约200rpm/min；所述培养的仪器为恒温摇床。

在本发明的部分实施例中，所述重组工程菌为酵母菌，具体的构建方法为：提取pPICZαA-AL重组质粒；将pPICZαA-AL重组质粒转化GS115酵母菌，利用含有博来霉素的YPD培养基筛选阳性菌株。