[发明专利]一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括提取液、基质缓冲液和显色底物，所述显色底物为4‑对二甲氨基苄胺盐酸盐，所述基质缓冲液为PIPES缓冲液。该检测试剂盒适用于动物组织、血清(浆)、细胞等样本，不仅操作简便，检测时间短，且检测成本低，环保无毒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

单胺氧化酶(MAO，EC1.4.3.4)是存在于细胞线粒体外膜上的，含有硫氢基的一种黄素蛋白。其在体内的主要功能是催化内源性和外源性单胺类物质的代谢。在MAO的作用下，单胺类物质被氧化而产生脱氨基作用。MAO广泛分布于中枢神经和神经末梢组织中，主要位于大脑、肝脏和肠粘膜等组织细胞线粒体的外膜上。MAO被认为是一种老化标志酶，随着年龄的增加，人体内的MAO活力上升，而异常的MAO的活性与神经病学上的紊乱有关，如MAO-B与帕金森综合征和阿尔茨海默症的发生密切相关，而MAO-A与精神疾病如抑郁症的发生密切相关。

目前市面上有售的单胺氧化酶酶活力检测试剂盒多采用犬脲胺法，但其存在以下缺点：样本提取过程中容易出现样本提取不完全、人为误差较大、检测时间很长，试剂存放条件严格、试剂用量大且试剂成本高等。另外，还有试剂盒采用醛苯腙比色法，其检测原理是：待测样品在MAO作用下，氧化底物苄胺生成苄醛，后者经催化反应生成醛苯腙(呈棕红色)，通过分光光度计检测470nm处吸光度，再根据标准曲线即可检测出MAO活力。该检测方法操作较为复杂，且苄醛需要苯肼催化才能生成醛苯腙，而苯肼本身有毒。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供了一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒及其使用方法，该检测试剂盒使用过程中，不需要将苄醛催化生成醛苯腙，可以直接进行检测，不仅简化检测流程、缩短检测时间，且灵敏度高、安全性更高。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，所述试剂盒包括提取液、基质缓冲液和显色底物，所述显色底物为4-对二甲氨基苄胺盐酸盐，所述基质缓冲液为PIPES(哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸))缓冲液。

进一步地，在上述技术方案中，所述提取液包括样本提取液和酶提取液，所述样本提取液和酶提取液均为蔗糖水溶液；更进一步地，所述样本提取液中蔗糖含量为5～20mmol/L，所述酶提取液中蔗糖含量为300～500mmol/L。

进一步地，在上述技术方案中，所述PIPES缓冲液中PIPES含量为30～50mmol/L，且所述PIPES缓冲液的pH为6.1～7.5。

进一步地，在上述技术方案中，所述显色底物溶于所述PIPES缓冲液中形成显色溶液，所述显色溶液中显色底物的含量为4～10mmol/L。

本发明还提供了上述单胺氧化酶酶活力检测试剂盒的使用方法，具体包括以下步骤：

S1、用提取液提取血清、血浆、组织或细胞样品，得待测样本；

S2、将待测样本与基质缓冲液、显色底物混合均匀，用酶标仪于355nm测初始OD值，记为A₁；

S3、在固定温度下孵育时间Tmin，用酶标仪于355nm测此时OD值，记为A₂；

若待测样本来自于血清或血浆样品时，采用式(1)计算：

若待测样本来自于细胞或组织样品时，采用式(2)计算：