[发明专利]一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途

说明书

本发明公开了一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途。试剂盒包括作为包被材料的第一受体蛋白、作为标记材料的第二受体蛋白及作为中和材料的中和抗原，其用于与病毒中和抗体结合。本发明首次提出基于竞争抑制原理采用双受体竞争抑制的免疫学方法来检测病毒的中和抗体，通过双受体夹心方式进一步放大了与中和抗原结合的信号，从而当样本中含有中和抗体时，与受体蛋白双竞争进而有更好的抑制率，本方法能够比单受体方法的阴阳性拉得更开，从而达到比单受体方法的灵敏度更高的目的，实现一个快速准确、高灵敏度和易操作以及仅需普通实验室条件的中和抗体检测方法。

技术领域

本发明涉及病毒抗体检测领域，具体涉及了一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途。

背景技术

当SARS-CoV-2(新型冠状病毒)在侵入机体时，会刺激机体产生具有保护作用的中和抗体，专门阻止病原微生物进入细胞。中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白，具有识别病毒表面蛋白、阻断其与细胞表面特异性受体结合的功能。在感染患者恢复期中含有高浓度的特异性抗体，在疫情期间被广泛报道的恢复期血浆疗法，这些特异性的抗体被识别为中和抗体，因此中和抗体的多少被认为是疫苗免疫保护效果的一项重要指标，是疫苗评估和质控的重要依据。接种疫苗的目的是使得人类产生保护性抗体即人体接种疫苗后可通过免疫应答产生的保护性抗体--中和抗体，对中和抗体进行滴度测定，可以判断疫苗的临床疗效。因此对中和抗体的检测，可应用于疫苗的研发评价，以及疫苗研发成功后，正式应用于大众后，对个体自身免疫效果的评价。

目前评价恢复期血浆或免疫球蛋白抗病毒能力的方法只有中和试验 (PRNT)，但是中和试验成本高(需要专业人员，专业场地以及专业的设备)、检测周期长(病毒需要培养，培养周期长)，条件要求高，因为需要使用活病毒，安全风险大，需要在P3实验室里操作。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途。本发明首次提出基于竞争抑制原理采用双受体竞争抑制的免疫学方法来检测病毒的中和抗体，具体地，通过双受体夹心方式进一步放大了与中和抗原结合的信号，从而当样本中含有中和抗体时，与受体蛋白双竞争进而有更好的抑制率，本方法能够比单受体竞争抑制的免疫学方法(以下简称“单受体方法”)的阴阳性拉得更开，从而达到比单受体方法的灵敏度更高的目的，实现一个快速准确、高灵敏度和易操作以及仅需普通实验室条件的中和抗体检测方法。本方法能够比单受体方法灵敏度提高50倍以上，甚至达到100倍以上，同时其特异性、抗干扰能力也较单受体方法强。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

第一方面，一种检测病毒中和抗体的试剂盒，所述试剂盒包括作为包被材料的第一受体蛋白、作为标记材料的第二受体蛋白及作为中和材料的中和抗原，其用于与病毒中和抗体结合。

通过双受体竞争抑制法来检测血液样品中的病毒中和抗体的存在，如果待测样品存在中和抗体，将会竞争抑制试剂盒的免疫学反应的信号，通过信号的变化来测试出待测样品的中和抗体的浓度变化。当样品中存在高浓度的中和抗体时，受体蛋白与中和抗原的免疫反应信号会被彻底抑制，当存在一定浓度的中和抗体时，免疫反应信号将被抑制一部分，通过抑制的信号强弱，可以判断样本中是否存在中和抗体，当免疫反应信号未受抑制时，机体内可能不存在中和抗体。

作为本发明提供的所述的检测病毒中和抗体的试剂盒的一种优选实施方式，所述第一受体蛋白和第二受体蛋白是通过不同的重组蛋白制备方法分别获得的受体重组蛋白。即，所述包被材料和标记材料为采用不同的重组蛋白制备方法获得的第一受体蛋白和第二受体蛋白，即第一受体蛋白和第二受体蛋白之间存在差异。

作为本发明提供的所述的检测病毒中和抗体的试剂盒的一种优选实施方式，所述第二受体蛋白是生物标记或化学标记的。

作为本发明提供的所述的检测病毒中和抗体的试剂盒的一种优选实施方式，所述的标记是辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、碱性磷酸酶标记、葡萄糖氧化酶标记、荧光素、生物素、微球、胶体金或胶体硒标记的。