[发明专利]一种牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂的制备及应用

权利要求书

1.一种淫羊藿苷载体，其特征在于：所述载体为牛乳外泌体。

2.一种牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂，其特征在于：所述制剂包括淫羊藿苷和牛乳外泌体，其中牛乳外泌体作为载体负载淫羊藿苷，两者体积比为淫羊藿苷：牛乳外泌体＝1:9。

3.根据权利要求2所述牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂，其特征在于：所述载体的平均粒径为100-200nm。

4.一种权利要求2所述牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将新鲜牛乳在4℃条件下，在60mL离心瓶中以13000-15000g离心30min-60min，取中层乳清；

2)600-800目真空泵过滤；

3)4℃，100000-150000g离心1-2h，取中层乳清；

4)1000-2000目真空泵过滤；

5)4℃，13000-15000g离心1-2h，留底部1-2ml，集于50ml EP管中；

6)4℃，100000-150000g离心1-2h，弃上清，分离出牛奶外泌体悬浮液；

7)、在室温下以体积比为1：9的比例混合淫羊藿苷与外泌体悬浮液；冷冻干燥后即得外泌体负载淫羊藿苷纳米药物。

5.根据权利要求4所述牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂的制备方法，其特征在于：提取牛乳外泌体后，采用纳米颗粒追踪分析和透射电子显微镜观察外泌体的大小、结构及形态；Western Blot检测外泌体表面标记因子CD63、ALIX、CD81及微囊表面标记物CD40的蛋白表达水平；PKH67荧光染色标记外泌体，检测MC3T3-E1对外泌体的摄取情况。

6.根据权利要求4所述牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂的制备方法，其特征在于：

1)将新鲜牛乳在4℃条件下，在60mL离心瓶中以13000g离心30min，取中层乳清；

2)600-800目真空泵过滤；

3)4℃，100000g离心2h，取中层乳清；

4)1000-2000目真空泵过滤；

5)4℃，13500g离心1.5h，留底部1-2ml，集于50ml EP管中；

6)4℃，100000g离心2h，弃上清，分离出牛奶外泌体悬浮液；

7)在室温下以体积比为1：9的比例混合淫羊藿苷与外泌体悬浮液；冷冻干燥后即得外泌体负载淫羊藿苷纳米药物。

7.根据权利要求4所述牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤6)中，分离出的牛奶外泌体悬浮液在-80℃冻存。