[发明专利]乙型肝炎病毒突变位点C147T在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及医学生物检测技术领域，具体是乙型肝炎病毒突变位点C147T在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用。本发明还提供一种预测肝癌复发的试剂盒。本发明优点在于：本发明发现在乙型肝炎病毒特定的区域某些特定位点的突变与乙型肝炎病毒阳性肝病，尤其是肝细胞癌的复发具有重要联系。检测乙肝感染者的C147T关键位点突变，并联合临床甲胎蛋白水平，能够提前发现肝癌的复发，并对患者进行早期干预治疗和及时的随访复查。

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，具体地说，是乙型肝炎病毒突变位点(C147T)在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用。

背景技术

肝癌是全球第六大最常见的癌症，也是全球第四大癌症死亡原因，每年新发病人约有841000例，其中有782000人死亡。该病严重危害患者的日常生活和身体健康，原发性肝癌早期的症状并不明显，也不具有典型性，容易被忽视，导致病情发展严重了才发现，影响了治疗的效果。所以，肝癌预后极差。近年来，肝癌手术切除技术不断提高，但由于术后复发率较高的原因，患者的生存时间和生活质量仍旧受到很大的限制。临床上常通过介入术对原发性肝癌患者进行治疗，但治疗效果的彻底性，以及肝癌的复发情况仍需在术后通过有效的检查手段进行确定。肝癌患者术后的复发率较高，可高达76.8％。50％以上的肝癌发生与乙型肝炎病毒(HBV)感染有关，且HBV感染的肝癌患者术后复发率显著高于非感染患者。因此，术前有效预判肝癌术后复发，对患者治疗方案的调整或预后的判断有着重要的参考价值。

目前认为：肿瘤大小、血管浸润、肝功能和术前营养状态等因素均与肝癌术后复发有关，但是临床上还没有一种很有效的手段能对肝癌的术后复发转移进行比较准确的预测，对肝癌的复发转移风险分层及早期干预、治疗的指导作用非常有限。目前常用的评估措施包括超声、CT检查以及MRI检查等，其中超声诊断因人为干扰较大，对医生的操作能力要求较高。DSA虽然检查的准确率较高，可以清晰的展示出术后的病灶残余与血供变化情况，但是费用较高，并且重复性也较差，难以进行普及。多层螺旋CT(MSCT)扫描速度快、层面薄，提高了小病灶的检出率，同时可清楚显示肝癌的血供情况，但费用较昂贵。微血管侵犯在肝癌术后复发的危险因素中扮演着重要角色，现临床对肝癌患者微血管侵犯的诊断主要依靠活检或术后病理学穿刺检查，因其属于有创性操作，在实际应用中受到一定范围的限制。血清学检查因其快速、简便、费用低、无痛苦等优势而成为大规模筛查的主要工具，现临床诊断肝癌主要依靠AFP(400ng/ml)，AFP是肝脏在胎儿发育过程中产生的一种主要血浆蛋白，在原发性肝癌患者中可升高，AFP水平升高与肿瘤复发和预后不良有关。但是，有部分肝硬化患者体内AFP水平会呈现持续升高状态，但是并没有肝癌迹象；而约有20％的晚期肝癌患者，AFP不高反而降低，因此AFP单一检验结果，并不能完全作为诊断肝癌的标准。寻找准确、方便的检查方法发现肝癌切除术后复发是临床亟需解决的问题，我们迫切需要找到一种新的高敏感度和特异度的诊断标志。

全世界有约超过30亿人感染乙型肝炎病毒，乙型肝炎病毒突变是肝硬化和肝细胞癌的重要危险因素之一，随着感染的持续，病毒的突变率逐渐增加。目前常用的突变检测方法为基因直接测序，但该方法费时、费力，达不到快速诊断的目的。因而，需要一种准确的检测的方法用于及早发现肝癌复发和实验室快速检测。

Taq-man探针荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低等优点，其特点是针对靶基因的突变部位设定探针，利用探针与模板的特异性结合，然后通过显色进行结果观察，简便实用，特异性高，灵敏度强。整个检测使用RT-PCR仪即可完成，操作方法更简单，结果准确性高。

发明内容

本发明的目的在于提供乙型肝炎病毒突变位点(C147T)在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用，并提供了一种检测肝癌复发的试剂盒。

本发明的第一方面，提供乙型肝炎病毒突变位点C147T作为预测和诊断肝癌复发标志物的应用。

本发明的第二方面，提供乙型肝炎病毒突变位点C147T在制备预测肝癌复发的试剂或试剂盒中的应用。