[发明专利]乙型肝炎病毒突变位点G40C在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及医学生物检测技术领域，具体是乙型肝炎病毒突变位点G40C在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用。本发明还提供一种预测肝癌复发的试剂盒。本发明优点在于：本发明发现在乙型肝炎病毒特定的区域某些特定位点的突变与乙型肝炎病毒阳性肝病，尤其是肝细胞癌的复发具有重要联系。检测乙肝感染者的G40C关键位点突变，并联合临床甲胎蛋白水平，能够提前预测肝癌的复发，并对患者进行早期干预治疗和及时的随访复查。

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，具体地说，是乙型肝炎病毒突变位点(G40C)在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用。

背景技术

原发性肝癌是世界上第六大常见的恶性肿瘤，全球每年约有84万新发肝癌病例，其中约78万例死亡。确诊时，70％以上患者已经失去了外科手术的机会。肝癌预后极差，目前肝癌治疗手段主要有手术切除、肝移植及介入治疗，术后高复发率特别是早期的复发严重影响治疗效果，肝癌根治性手术术后在6、12、24个月时的复发率分别为27.0％，39.7％和45.6％，乙肝相关肝癌的中位生存时间约为16个月，五年生存率介于15％-26％之间。因此，如何提前发现肝癌复发并对其进行长期监测具有重要的意义。

目前认为：肿瘤大小、血管浸润、肝功能等因素均为肝癌术后复发的重要危险因素，但是没有任何一种有效的方法对患者的预后进行准确评估。寻找准确、方便的检查方法提早发现肝癌术后复发是临床亟需解决的问题。目前较常用的方法是彩色多普勒超声，它可以无创性的评估肝脏血流情况，重复性较高，但是该方法很大程度上取决于检查者的经验，故限制了其在肝癌诊断和随访观察中的应用。多层螺旋CT(MSCT)扫描速度快、层面薄，提高了小病灶的检出率，同时可清楚显示肝癌的血供情况，但费用较昂贵。血管造影对小肝癌检出率高，但其有创性及高费用限制了筛查价值。血清学检查因其快速、简便、费用低、无痛苦等优势而成为大规模筛查的主要工具，现临床诊断肝癌主要依靠AFP(400ng/ml)，HCC患者血清AFP水平升高被认为是肿瘤分化程度较低的标志。在实际诊断中，患者瘤体体积＜3cm³时，患者体内AFP含量会出现明显减低，导致假阴性结果。有部分肝硬化患者体内AFP水平会呈现持续升高状态，但是并没有肝癌迹象；而约有20％的晚期肝癌患者，AFP不高反而降低，因此AFP单一检验结果，并不能完全作为诊断肝癌的标准。所以，我们迫切需要找到一种新的高敏感度和特异度的诊断标志。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属嗜肝病毒科(hepadnaviridae)中正类嗜肝病毒属(orthohepadnavirus)，由不完全的环状双链DNA组成，根据基因差异率超过8％，可将乙型肝炎病毒分为A-H八个基因型。目前常用的突变检测方法为基因直接测序，但该方法费时、费力，达不到快速诊断的目的。因而，需要一种准确的检测的方法用于识别肝癌复发和实验室快速检测。

Taq-man探针荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低等优点，其特点是针对靶基因的突变部位设定探针，利用探针与模板的特异性结合，然后通过显色进行结果观察，简便实用，特异性高，灵敏度强。整个检测使用RT-PCR仪即可完成，操作方法更简单，结果准确性高。

发明内容

本发明的目的在于提供乙型肝炎病毒突变位点(G40C)在制备预测肝癌复发的试剂盒中的应用，并提供了一种预测肝癌复发的试剂盒。

本发明的第一方面，提供乙型肝炎病毒突变位点G40C作为预测和诊断肝癌复发的标志物的应用。

本发明的第二方面，提供乙型肝炎病毒突变位点G40C在制备预测肝癌复发的试剂或试剂盒中的应用。

进一步的，所述的试剂或试剂盒为检测乙肝感染者的乙肝病毒PreS区G40C突变的试剂或试剂盒。