[发明专利]一种快速检测新型冠状病毒D614G突变的引物组合物及试剂盒

说明书

本发明提供了一种快速检测新型冠状病毒D614G突变的引物组合物及试剂盒，该引物组合物包括引物组和PNA探针；该PNA探针的序列如SEQ ID NO：7所示；引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物和LB引物，选自包括序列如SEQ ID NO：2～6的组合物、包括序列如SEQ ID NO：14～18的组合物、包括序列如SEQ ID NO：19～23的组合物和包括序列如SEQ ID NO：24～28的组合物的一组或者几组；或，引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、LB引物和LF引物，为序列如SEQ ID NO：8～13的组合物。本发明基于LAMP技术开发了一种快速检测新型冠状病毒D614G突变的引物组合物及试剂盒，无需复杂、昂贵的辅助设备，在30‑60min内即可实现核酸分子标志物的快速检测，检测结果可以通过目视法直接判断，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种快速检测新型冠状病毒D614G 突变的引物组合物及试剂盒。

背景技术

冠状病毒(Coronavirus，CoV)，因其包膜表面有一圈形似日冕的棘突而得 名，广泛存在于自然界中，是一种呼吸道病毒，其宿主包括人类、脊椎动物和无 脊椎动物。冠状病毒属套氏病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属，为有包膜的正股 单链RNA病毒，直径为80～120nm，约有3万个碱基组成，其遗传物质是已知 RNA病毒中最大的。国际病毒分类命名委员会在2012年根据其遗传学差异和血 清学特性将冠状病毒分为α、β、γ、δ四群，其中β群CoV又进一步分为A、B、 C、D四个组。α、β两群易感染哺乳动物，包含了7种对人类致病的冠状病毒， 分别为HCoV-OC43、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、 MERS-CoV和SARS-CoV-2；而γ、δ两群则主要感染禽类。冠状病毒是一种常 见的、易引发呼吸道疾病的病原体，在引起成人社区获得性肺炎的病毒中，冠状 病毒检出率与其他呼吸道病毒的检出率相似。SARS-CoV-2感染不仅会对人类的 生命安全构成威胁，还会对全球社会经济造成极大损失，我们需要“未雨绸缪”， 积极应对，对其流行病学和致病机制进行深入研究，积极研发新型特效药和疫苗， 并开发出更有效的检测手段，把冠状病毒扼杀于“摇篮”阶段，为人类的健康保 驾护航。

由于病毒自身的结构特征及宿主众多，导致该病毒极易发生变异，产生新类 型的冠状病毒突变体。变异新冠病毒不会增加疾病严重性，但其会导致更高的发 病率，产生更多住院及死亡病例，所以需要采取更严格的公共卫生措施来控制这 些变异病毒的传播，确保新冠肺炎“可防、可控、可治”。

D614G是出现的新冠病毒刺突蛋白(spike protein，S蛋白)里的一种氨基 酸的变异，即占据614号位置的是一个天冬氨酸(D)。而变异之后，这个位置 变成了甘氨酸(G)，S蛋白是病毒入侵细胞的“攻城锤”，也是许多疫苗和疗 法所针对的目标。因此，刺突蛋白上的突变可能会改变刺突蛋白的性质，让病毒 更容易入侵细胞，或者让疫苗和药物对其失去效果。目前D614G全球最主流的 SARS-CoV-2突变株之一，快速检测SARS-CoV-2突变情况，及时了解病毒株的 主流突变情况，对于疫情的防控、疾病的诊疗和疫苗的研发等均具有重要的意义。

目前逆转录实时PCR技术被认为是SARS-CoV-2检测“金标准”，然而该 技术操作复杂，扩增速度较慢(2-3个小时)，需要在要求较高的实验室内才能 进行，所需的检测设备价格昂贵，而且需要训练有素的专业技术人员才能进行检 测，导致该技术难以推广，尤其是基础设施薄弱、偏远落后的地区难以推广。而 环介导等温扩增技术(LAMP)是利用设计的四对特殊引物和具有连置换活性的 Bst DNA聚合酶(具有链置换特性)，在60-65℃恒温条件下进行特异、高效、 快速的扩增靶核酸。但目前未有采用LAMP技术检测新型冠状病毒D614G突变 的报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种快速检测新型冠状病毒D614G突 变的引物组合物及试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：