[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒样颗粒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种禽传染性支气管炎病毒样颗粒，所述病毒样颗粒由IBV‑S、IBV‑M、IBV‑E基因分别转入到杆状病毒表达系统中，获得3种重组杆粒，再分别将3种重组杆粒转染到昆虫细胞中，获得重组杆状病毒rHBM‑S、rHBM‑M和rHBM‑E，然后通过共感染的形式，初步构建得到，该病毒样颗粒应用于制备疫苗中，具有巨大的开发潜力。

技术领域

本发明涉及基因工程与医学免疫学技术领域，更具体地说是涉及一种禽传染性支气管炎病毒样颗粒及其制备方法与应用。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由冠状病毒鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性高度接触性传染性疾病，是国际兽疫局及我国规定的家禽二类传染病之一。不同日龄、性别、品种鸡均对IB易感。该病危害主要在三个方面：第一，破坏呼吸道黏膜的完整性，促进其它条件性疾病如支原体混合感染以及大肠杆菌等继发感染等的发生而使鸡群的死亡率增加；第二，侵害种鸡生殖系统，使后备母鸡发生输卵管炎，导致输卵管堵塞，造成产蛋障碍综合症，即所谓的“假母鸡”；第三，侵害肾脏、肠道、肌肉等，导致鸡的增重、产蛋和蛋品质、饲料报酬率等均降低，给养鸡生产带来额外的损失。尽管使用多种商品疫苗免疫，但近年来IB仍大面积频繁地发生，给养禽业造成很大的经济损失。

IBV属冠状病毒科冠状病毒属，是不分节段的单股正链RNA病毒。病毒粒子在电镜下呈圆形或多边形，有囊膜，直径在90nm～200nm，表面有长约20nm的棒状纤突。其基因组大约由27600个核苷酸组成，全长约27kb，有4种结构蛋白，即纤突(S)蛋白、小囊膜(E)蛋白、膜(M)蛋白和核衣壳(N)蛋白。S蛋白具有许多重要的生物学功能，包括含有与病毒中和、血凝抑制抗体、细胞吸附、组织亲和性、毒力、血清型特异性有关的抗原位点，也是IBV蛋白中变异程度最大的结构蛋白；M蛋白能控制并介导病毒粒子组装，在有补体存在的情况下，M蛋白还可中和病毒的感染；E蛋白对包膜形成非常重要。M蛋白和E蛋白间的相互作用对病毒样颗粒形成非常重要，是形成病毒粒子的最小组成单位。

IBV容易变异，血清型和基因型众多，各型间交叉保护作用弱。目前，疫苗接种仍然是当前防控该病的主要有效手段，然而传统的灭活苗和弱毒苗分别在安全性和免疫原性方面存在缺陷，无法提供完全有效的保护。弱毒疫苗存在毒力返强的风险，并可为IBV的基因重组提供条件。灭活苗存在灭活不全的危险，单价的灭活疫苗很难控制IBV变异株引起的IB暴发，往往需要制备多价油乳灭活疫苗，且存在使用量大、需配合佐剂使用、制备复杂、抗原结构易受破坏、成本较高等缺点。此外，由于流行毒株血清型与所用疫苗株不同，常常出现免疫偏差，导致免疫失败。因此，研制与流行毒株血清型相同的有效安全的疫苗非常有必要。

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒的一个或多个结构蛋白在异源系统中重组表达并通过“自发性”的聚合作用自行组装而成的蛋白质颗粒。VLPs是不含病毒核酸的空心颗粒，具有安全性高、免疫原性强、稳定性好、不易失活、可塑性强的特点，而且能够刺激机体产生有效的免疫应答。VLPs作为一种新型亚单位疫苗，具有良好的安全性和免疫原性，是目前最有发展前景的候选基因工程疫苗。如今，VLPs技术已被广泛应用于疫苗研究领域，可以作为有效的独立疫苗，也被作为疫苗研究的重要平台。虽然已经报道有100多种病毒VLPs被成功构建，但是已经商品化的兽用VLPs疫苗却寥寥无几，目前市面上还没有对于IB的VLPs疫苗，构建VLPs疫苗具有巨大的商业价值和开发潜力

因此，如何提供一种禽传染性支气管炎病毒样颗粒并将其应用于疫苗制备中是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种禽传染性支气管炎病毒样颗粒SME-VLPs，其具有更高的免疫原性，可应用于制备疫苗中，具有巨大的开发潜力。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：