[发明专利]诱导间充质干细胞释放促进皮肤上皮细胞分化特定功能外泌体的组合物及其应用

说明书

本发明公开了诱导间充质干细胞释放促进皮肤上皮细胞分化特定功能外泌体的组合物及其应用。该组合物含有ROCK抑制剂、表皮生长因子和活性肽。该特定功能外泌体具有下述至少一种功能：1)促进皮肤成纤维细胞向上皮细胞分化，2)促进光损伤皮肤修复和/或促进光老化损伤皮肤修复，3)抵抗皮肤的光损伤和/或光老化损伤，4)提高皮肤抗氧化能力。该特定功能的外泌体可通过皮肤表皮涂抹或无针注射无创导入损伤皮肤细胞和组织内，参与皮肤的修复，具有预防和/或治疗光损伤老化的功效，可成为皮肤康复的无细胞替代治疗的生物类药物。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，涉及诱导间充质干细胞释放促进皮肤上皮细胞分化特定功能外泌体的组合物及其应用。

背景技术

外泌体(exosome)是细胞内吞过程的末端产物，由脂质双层膜形成的细胞器来结构。体内所有的细胞都具备产生和分泌外泌体的功能。通常细胞通过胞吞将外源性物质形成内吞小泡进入细胞质内，在高尔基体等细胞器的作用下，以出芽形成早期胞内体(earlyendosomes)，选择性地接受细胞内的蛋白质、核酸、脂类等生物活性成分，再次出芽形成晚期胞内体(late endosomes)，最终形成多囊泡(multivesicular bodies,MVB)与细胞膜融合，以胞吐的形式排放小囊泡，直径约在30-150nm，称为外泌体。外泌体包含的成分与来源细胞相似，富含蛋白质，活性多肽，脂类和mRNAs、miRNAs、lncRNAs等核酸分子。外泌体通过细胞之间的通讯，可介导细胞内信号调控，直接激活靶细胞，使靶细胞发生一系列生物学效应。外泌体具有归巢机制改变损伤组织的微环境，修复损伤。

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)有多种组织来源，包括骨髓、脂肪组织、牙髓、脐血、羊水、胎盘、羊膜、脐带华通氏胶等。各种来源的间充质干细胞均具有克隆化生长、自我更新和多潜能分化的能力。间充质干细胞可通过分化作用成为相应组织的细胞，修复损伤组织，起到替代作用。间充质干细胞还具有旁分泌因子效应，可以促进损伤组织的自身修复。间充质干细胞具有免疫原性较低和免疫调节功能，具有临床应用安全性。因此，已有大量的研究报道，各种来源的间充质干细胞治疗皮肤损伤，包括皮肤创面愈合、皮肤切割伤口愈合、皮肤烧伤的治疗等。然而由于间充质干细胞的大小在10-25μm之间，不能无创透膜，在皮肤的应用过程中存在局限性。

皮肤暴露身体表面易受干燥、紫外线及有毒物质等环境因素伤害，受损皮肤引发的老化、皮炎、湿疹等皮肤问题，会影响生活质量。间充质干细胞分泌的外泌体基于纳米级(30-150nm)大小特性、无免疫原性、无致瘤性及与干细胞类似的生物学功能等，也有大量研究报道。其中不乏采用转基因、乏氧、小分子诱导等方法获得特异功能的细胞释放外泌体的研究报道。

尽管皮肤是人体再生能力较强的器官，但光老化损伤、年龄相关的皮肤变薄松弛、毛细血管扩张、皱纹形成等诸多问题仍需具有特定功能的干细胞衍生外泌体的干预治疗。外泌体通过无针注射可以无创导入损伤皮肤细胞和组织内，参与皮肤的修复，有望成为皮肤康复的无细胞治疗生物类药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何诱导间充质干细胞释放特定功能外泌体。所述特定功能外泌体具有下述至少一种功能：1)促进皮肤成纤维细胞向上皮细胞分化，2)促进光损伤皮肤修复和/或促进光老化损伤皮肤修复，3)抵抗皮肤的光损伤和/或光老化损伤，4)提高皮肤抗氧化能力。

为了解决以上技术问题，本发明提供了诱导间充质干细胞释放外泌体的组合物。

本发明所提供的诱导间充质干细胞释放外泌体的组合物，含有选择性Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(selective inhibitor of Rho-associated,coiled-coilcontaining protein kinase，ROCK)抑制剂、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和活性肽。